人T细胞生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人T细胞生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)ELISA试剂盒用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中T细胞生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)抗体水平。

实验原理：用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入T细胞生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)抗体抗原、生物素化的T细胞生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的T细胞生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)抗体呈正相关。

人T细胞生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)ELISA试剂盒

使用方法：

1、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

2、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

3、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

4、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

5、温育：操作同3。

6、洗涤：操作同5。

7、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

8、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

应用^[4][5]

用于重组人白介素-2的纯化工艺研究研究

在丝裂原刺激的淋巴细胞培养上清或称条件培养基（Conditional medium,CM）中存在一种细胞因子，他能过选择性地维持T淋巴细胞在体外长期生长，人们将该因子称为T细胞生长因子（T cell growthfactor,TCGF）。

在1979年瑞士召开的第二届国际淋巴因子会议上，专家们规定将联系白细胞间相互作用的因子统称为白细胞介素（Interleukin,IL）;将有激活的T细胞产生的，在淋巴细胞间起相互作用的因子，即以往的TCGF称为白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）。

白细胞介素是非常重要的细胞因子家族，它们在免疫细胞的成熟，活化，增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用，此外它们还参与机体的多种生理及病理反应。白细胞介素-2（IL-2）是机体免疫应答的核心物质，是由T淋巴细胞（特别是CD4+T细胞）分泌的一种糖蛋白，为一种多肽类药物，又称T细胞生长因子，系目前首选抗肿瘤生物治疗药物。

随着研究的不断深入，尤其是1983年基因工程（重组）IL-2的问世，使得IL-2的研究取得了更大的进展。人们发现IL-2除了作用于T细胞外，还可作用于多种免疫效应细胞，包括B细胞，巨噬细胞，NK细胞。刺激能产生抗体的B细胞增殖并能诱导产生新型的杀伤细胞即淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）。

白细胞介素-2在机体免疫应答中具有重要作用，是一种免疫增强剂，具有抗病毒，抗肿瘤及改善和提高机体免疫功能的作用。可提高人体对病毒，细菌，原虫等感染的免疫应答，清除体内肿瘤细胞和病毒感染细胞等。还可以增进抗体和干扰素的分泌，可刺激产生IFN－γ和TNF－α，β；促进Th的增殖和激活；活化中性粒细胞；刺激NK和肿瘤侵润淋巴细胞（TIL）增殖。

参考文献

[1]High-dose interleukin-2（IL-2）for the treatment of melanoma:safety considerations and future directions[J].Marabondo,Kaufman.Expert Opinion on Drug Safety.2017(12)

[2]Interleukin-2 Activity Can Be Fine Tuned with Engineered Receptor Signaling Clamps[J].Suman Mitra,Aaron M.Ring,Shoba Amarnath,Jamie B.Spangler,Peng Li,Wei Ju,Suzanne Fischer,Jangsuk Oh,Rosanne Spolski,Kipp Weiskopf,Holbrook Kohrt,Jason E.Foley,Sumati Rajagopalan,Eric O.Long,Daniel H.Fowler,Thomas A.Waldmann,K.Christopher Garcia,Warren J.Leonard.Immunity.2015(5)

[3]Low-dose interleukin-2 fosters a dose-dependent regulatory T cell tuned milieu in T1D patients[J].Michelle Rosenzwajg,Guillaume Churlaud,Roberto Mallone,Adrien Six,Nicolas Dérian,Wahiba Chaara,Roberta Lorenzon,S.Alice Long,Jane H.Buckner,Georgia Afonso,Hang-Phuong Pham,Agnès Hartemann,Aixin Yu,Alberto Pugliese,Thomas R.Malek,David Klatzmann.Journal of Autoimmunity.2015

[4]Circulating Follicular Helper–Like T Cells in Systemic Lupus Erythematosus:Association With Disease Activity[J].Jin‐Young Choi,John Hsi‐en Ho,Sandra G.Pasoto,Viviane Bunin,Sang Taek Kim,Solange Carrasco,Eduardo F.Borba,Celio R.Gon?alves,Priscila R.Costa,Esper G.Kallas,Eloisa Bonfa,Joseph Craft.Arthritis&Rheumatology.2015(4)

[5]高晋.重组人白介素-2的纯化工艺研究[D].吉林大学,2012.