改良马丁琼脂培养基的应用

背景^[1-3]

改良马丁琼脂培养基是医学实验、生物研究中应用非常广泛的一种体外诊断试剂，改良马丁培养基主要运用于血液、胸、腹水等标本中真菌生长的液体培养基，检测标本中是否有真菌存在，从而可以判断组织中是否被真菌感染。

检验原理：改良马丁培养基主要提供真菌类生长的营养成分，可作为无菌检验中真菌类生长与否的判断依据。

改良马丁琼脂培养基成分(g/L)：蛋白胨5.0；磷酸氢二钾1.0；硫酸镁0.5；酵母浸出粉2.0；葡萄糖20.0；琼脂14.0；pH值6.4±0.2，25℃。

改良马丁琼脂培养基

用法：称取本品42.5g，加热搅拌溶解于1000ml纯化水中，分装，115℃高压灭菌20分钟，用11mol/L的硫酸调节pH至6.4.混匀,倾注平板。(注:配制不同用量体积,可按比例扩增或缩小。)取0.1mL样品液或培养液接种至此平板表面,于25±2℃培养3~5d。

真菌（Fungus）是一种真核生物。在生物学分类上属于藻菌植物中真菌超纲。微生物中只有真菌具有真正的细胞核和完整的细胞器，故又称真核细胞型微生物。最常见的真菌是各类蕈类，另外真菌也包括霉菌和酵母。现在已经发现了七万多种真菌，估计只是所有存在的一小半。大多真菌原先被分入动物或植物，现在成为自己的界，分为四门。

应用^[4][5]

用于450-470nm可见光对白色念珠菌杀灭作用的实验研究

讨论蓝光对体外游离和生物膜内白色念珠菌及小鼠创面上白色念珠菌的杀灭作用。

研究方法1.450-470nm可见光杀灭游离状态白色念珠菌的实验研究:采用平板涂板法检测0、12、60、120、240J/cm2能量密度的蓝光对白色念珠菌的杀灭作用;流式细胞术检测240J/cm2能量密度的蓝光照射后0.5h、1h、2h后白色念珠菌的死亡率。

2.450-470nm可见光杀灭生物膜内白色念珠菌的实验研究:构建白色念珠菌生物膜体外模型;将成熟生物膜模型分为空白对照组和蓝光干预组两组,蓝光干预组采用240J/cm2能量密度的蓝光照射,然后两组采用Live/Dead染料染色后在激光扫描共焦显微镜下观察并比较蓝光的杀菌效果。

3.450-470nm可见光杀灭小鼠皮肤创面上的白色念珠菌的实验研究:24只裸鼠随机均分为蓝光干预组、阳性对照组、阴性对照组三组,全部制作裸鼠背部1cmx1cm皮肤全层缺损创伤模型;于蓝光干预组、阳性对照组创面上接种20ul浓度为1x109 CFU/ml的白色念珠菌菌液;蓝光干预组采用240J/cm2能量密度的蓝光分别于第1、2、3天进行照射;采用平板涂板法检测蓝光杀菌效果;对各组小鼠创面愈合情况、小鼠体重变化进行监测比较,对小鼠皮肤行苏木精-伊红染色并在显微镜下观察炎性细胞的浸润情况。

结果1.60J/cm2、120J/cm2、240J/cm2能量密度的蓝光可以有效杀灭体外游离白色念珠菌,P均<0.05;白色念珠菌经过240J/cm2能量密度的蓝光照射后0.5h、1h、2h后与空白对照组三个时相点的死亡率相比,差异显著,p均<0.05。

2.白色念珠菌在96微孔板中培养3d即可形成成熟的生物膜;240J/cm2能量密度的蓝光可以杀灭生物膜全层内的白色念珠菌。

参考文献

[1]Effects of 420‐nm intense pulsed light in an acne animal model[J].X.Fan,Y.‐Z.Xing,L.‐H.Liu,C.Liu,D.‐D.Wang,R.‐Y.Yang,M.Lapidoth.Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology.2013(9)

[2]Candida albicans biofilms:building a heterogeneous,drug-tolerant environment[J].Julie Bonhomme,Christophe d’Enfert.Current Opinion in Microbiology.2013(4)

[3]Blue light for infectious diseases:Propionibacterium acnes,Helicobacter pylori,and beyond?[J].Tianhong Dai,Asheesh Gupta,Clinton K.Murray,Mark S.Vrahas,George P.Tegos,Michael R.Hamblin.Drug Resistance Updates.2012(4)

[4]Blue Light Induced Free Radicals from Riboflavin on E.coli DNA Damage[J].Ji-Yuan Liang,Jeu-Ming P.Yuann,Chien-Wei Cheng,Hong-Lin Jian,Chin-Chang Lin,Liang-Yu Chen.Journal of Photochemistry&Photobiology,B:Biology.2012

[5]王川.450-470nm可见光对白色念珠菌杀灭作用的实验研究[D].上海交通大学,2015.