大鼠对氯苯丙氨酸(PCPA)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠对氯苯丙氨酸(PCPA)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA)检测样本中大鼠对氯苯丙氨酸(PCPA)的含量。

原理：往预先包被大鼠对氯苯丙氨酸（PCPA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠对氯苯丙氨酸（PCPA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

对氯苯丙氨酸(PCPA)

样本要求

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于基于代谢组学技术研究交泰丸干预对氯苯丙氨酸致失眠的作用机制研究

基于核磁共振（1H-NMR）代谢组学技术,结合生化指标分析,研究交泰丸对失眠模型大鼠的干预作用,探讨交泰丸干预失眠的作用机制。

方法:将雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和交泰丸组。交泰丸组灌胃交泰丸水提液,每天1次,连续5天,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水。实验第3天,模型组和交泰丸组一次性腹腔注射PCPA甲酯盐酸盐（564 mg·kg-1,相当于PCPA 450mg·kg-1）建立失眠模型,正常组一次性腹腔注射等体积生理盐水。

实验期间观察大鼠自发活动变化。基于1H-NMR代谢组学技术测定尿液样本、血清样本和海马组织的代谢物图谱,对代谢物图谱进行正交偏最小二乘判别分析（Orthogonal Partial Least-Squares Discriminant Analysis,OPLS-DA）,运用变量重要性投影（Variable Importance in the Projection,VIP）和t检验筛选出组间具有显著差异的代谢物。

用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠下丘脑、海马、前额叶皮质和血清中神经保护因子如脑源性神经营养因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）水平,凋亡相关因子如B细胞淋巴瘤因子-2（Bcl-2）及其相关X蛋白（Bax）,神经递质如谷氨酸（Glu）、胆囊收缩素8（CCK-8）水平,细胞因子白细胞介素（IL）-2、IL-6和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）水平,并采用考马斯亮蓝法（Bradford法）测定组织样品蛋白含量。

参考文献

[1]Icariin reverses corticosterone-induced depression-like behavior,decrease in hippocampal brain-derived neurotrophic factor（BDNF）and metabolic network disturbances revealed by NMR-based metabonomics in rats[J].Meng-juan Gong,Bin Han,Shu-mei Wang,Sheng-wang Liang,Zhong-jie Zou.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis.2016

[2]The effect of Mongolian medical acupuncture on cytokines and neurotransmitters in the brain tissue of insomniac rats[J].Lengge Si,Yuehong Wang,Gerile Wuyun,Lidao Bao,B.Agula.European Journal of Integrative Medicine.2015(5)

[3]Postsynaptic Depolarization Enhances GABA Drive to Dorsomedial Hypothalamic Neurons through Somatodendritic Cholecystokinin Release[J].Karen M.Crosby,Dinara V.Baimoukhametova,Jaideep S.Bains,Quentin J.Pittman.Journal of Neuroscience.2015(38)

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[5]岳贺.基于代谢组学技术研究交泰丸干预对氯苯丙氨酸致失眠的作用机制[D].广东药科大学,2017.