TUBULIN抗体的应用

背景^[1-3]

TUBULIN抗体是用纯化的微管蛋白作为抗原制备而成的抗Tubulin小鼠单克隆抗体。本抗体用于常规的Western检测可以特异性识别α-tubulin的C-terminal。

β-Tubulin即微管蛋白，是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin，其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成异源二聚体，是形成微管的最主要的两种Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa，其实际检测条带均在55kDa左右。作为内参抗体，Abbkine的β-tubulin抗体的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western Blotting时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。β-Tubulin抗体的英文别名有βtubulin antibody,TUBB antibody。

TUBULIN

β-Tubulin内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。目的蛋白的大小，推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于β-Tubulin的检测分子量大约在55kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测50kD-60kD大小目标蛋白的WB实验中。另外，不同的组织来源的样本在选择内参时还有一定的区别。比如一些少量特殊的情况下，如脂肪组织或细胞内，β-Actin的表达量就很少，不适合做内参。

应用^[4][5]

用于低温胁迫对甘蔗幼苗根系生长代谢的影响和相关基因α-tubulin的功能研究

成功构建pET30a（+）-α-tubulin原核表达载体,利用IPTG诱导产生融合蛋白,原核表达结果显示重组的pET30a（+）-α-tubulin为49.6kDa。重组蛋白通过Ni2+-NTA柱亲和层析纯化和透析浓缩后制备单克隆抗体,用ELISA法检测α-tubulin单克隆的效价,结果表明本研究所制备的α-tubulin单克隆抗体的效价高于1：512000。

用Western Blot检测甘蔗α-微管蛋白获得了特异性的条带,说明甘蔗α-微管蛋白单克隆抗体已被成功制备。

利用qRT-PCR技术分析了α-tubulin基因在甘蔗中转录水平的表达,结果表明α-tubulin基因在甘蔗茎中的表达量最高,根中次之,叶中最少。低温胁迫下,α-tubulin基因在根、茎和叶中的表达量是先升高后降低,最后差异逐渐减小。

利用Western Blot方法检测α-tubulin基因在甘蔗中蛋白质水平的表达,发现ROC22根中α-微管蛋白表达逐渐下降,而GT28中α-微管蛋白先升高后下降,但都高于对照。5.成功构建了烟草表达载体pBI121-α-tubulin和甘蔗表达载体pCAMBIA3300-α-tubulin。

将分别受CaMV35S和Ubi启动子控制的pBI121-α-tubulin和pCAMBIA3300-α-tubulin通过运用农杆菌介导法转入野生型烟草植株K346和甘蔗品种ROC22,经PCR检测和GFP观察以及Bar基因检测确证获得转基因烟草和甘蔗。

参考文献

[1]Climate Change and Sugarcane Production:Potential Impact and Mitigation Strategies[J].Duli Zhao,Yang-Rui Li,Glaciela Kaschuk.International Journal of Agronomy.2015

[2]Sugarcane Agriculture and Sugar Industry in China[J].Yang-Rui Li,Li-Tao Yang.Sugar Tech.2015(1)

[3]Reactive Oxygen Species and Alternative Respiration in the Developing Flowers of Two Subtropical Woody Plants[J].Nan Liu,Zhifang Lin.Journal of Plant Growth Regulation.2013(1)

[4]Arsenic-induced morphogenic response in roots of arsenic hyperaccumulator fern Pteris vittata[J].Laura Maria Costantina Forino,Monica Ruffini Castiglione,Giacomo Bartoli,Mirko Balestri,Andrea Andreucci,Anna Maria Tagliasacchi.Journal of Hazardous Materials.2012

[5]孙波.低温胁迫对甘蔗幼苗根系生长代谢的影响和相关基因α-tubulin的功能研究[D].广西大学,2016.