LNCAP CLONE FGC人前列腺癌细胞的应用

背景^[1-3]

LNCAP CLONE FGC人前列腺癌细胞是从一位50岁白人男性(血型B+)的左锁骨淋巴结针刺活检中分离，该患者经确诊为前列腺癌转移。LNCaP clone FGC细胞对5-α-二氢睾酮(生长调节子和酸性磷酸脂酶产物)有响应。LNCaP clone FGC细胞并不形成一致的单层，而是形成集落，在传代时可以用滴管反复吹吸打碎。LNCaP clone FGC细胞仅仅轻轻地吸附在基底上，不形成汇合，很快使培养基变酸。LNCaP clone FGC细胞生长极其缓慢，传代后48小时内不应扰动。当培养瓶封包后，多数LNCaP clone FGC细胞从培养瓶底分离，悬浮在培养基中。

LNCAP CLONE FGC人前列腺癌细胞

培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于基于前列腺膜抗原的肿瘤靶向喜树碱前药设计、合成及活性评价研究

在前药原理指导下,以PSMA的特异性水解底物Asp-Glua*Glu*Glu*Glu（WT-H）、Asp-Glu*Glu*Asp-Glu（HT-H）和Glu*Glu*Glu*Asp-Glu（HT-J）（“*”表示γ-谷酰基连接;“-”表示α-谷酰基连接）作为肿瘤靶向配体,将其与喜树碱20位羟基通过不同的连接片段连接,设计并合成12种全新的水溶性肿瘤靶向喜树碱前药CPT-X;

同时为了更好地研究前药的PSMA靶向性,合成8种前药CPT-X的PSMA代谢产物CPT-MX;采用PSMA过表达的人前列腺癌LNCaP-FGC（PSMA+）细胞和多种PSMA阴性表达的肿瘤细胞（MCF-7、HepG2、Hela、PC-3和DU145）和人正常肝细胞（L02）评价CPT-X和CPT-MX的细胞毒活性和PSMA靶向性;

采用流式细胞分析和激光共聚焦显微镜进一步验证前药CPT-W12的细胞毒选择性和PSMA靶向性;利用重组人PSMA和人乳腺癌细胞MCF-7裸鼠移植瘤模型,采用高效液相色谱法和小动物活体成像系统,评价前药CPT-W12的体外靶向释放和体内靶向分布特性;

采用BALB/c小鼠评价前药CPT-W12在小鼠体内的药代动力学特性;采用人乳腺癌细胞MCF-7裸鼠移植瘤模型评价前药CPT-W12的体内抗肿瘤活性和安全性;采用免疫组化研究前药CPT-W12对肿瘤组织中Ki-67、Caspase-3、Bcl-2和MMP-2蛋白表达情况的影响,探讨其可能的抗肿瘤作用机制。

参考文献

[1]Peptide-Drug Conjugate:A Novel Drug Design Approach[J].Liang Ma,Chao Wang,Zihao He,Biao Cheng,Ling Zheng,Kun Huang.Current Medicinal Chemistry.2017(31)

[2]Self‐Assembly of an Amphiphilic Janus Camptothecin–Floxuridine Conjugate into Liposome‐Like Nanocapsules for More Efficacious Combination Chemotherapy in Cancer[J].Xiaolong Liang,Chuang Gao,Ligang Cui,Shumin Wang,Jinrui Wang,Zhifei Dai.Advanced Materials.2017(40)

[3]Redox-responsive molecular gels based on camptothecin prodrug with disulfide linkage for controlled and sustained drug release[J].Xiupeng Chang,Youmei Li,Shu Chen,Feng He,Renxi Zhuo.Wuhan University Journal of Natural Sciences.2017(5)

[4]Combination of amino acid/dipeptide with ligustrazine-betulinic acid as antitumor agents[J].Bing Xu,Wen-Qiang Yan,Xin Xu,Gao-Rong Wu,Chen-Ze Zhang,Yao-Tian Han,Fu-Hao Chu,Rui Zhao,Peng-Long Wang,Hai-Min Lei.European Journal of Medicinal Chemistry.2017

[5]徐冰.基于前列腺膜抗原的肿瘤靶向喜树碱前药设计、合成及活性评价[D].北京中医药大学,2019.