SK-BR-3人乳腺癌细胞的应用

背景^[1-3]

SK-BR-3人乳腺癌细胞是由Trempe·G和Old·L·J于1970年从一位43岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离得到的。SK-BR-3细胞亚显微结构特征包括微丝和桥粒、肝糖原颗粒、大溶酶体、成束的细胞质纤丝；SK-BR-3细胞过表达HER2/c-erb-2基因产物，细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

SK-BR-3人乳腺癌细胞

培养步骤

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于狼毒大戟提取物联合吡咯替尼对人乳腺癌SK-BR-3细胞株的生长抑制作用研究

运用CCK-8实验方法检测狼毒大戟提取物对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖是否有影响,狼毒大戟提取物的药物浓度分别为1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml、200mg/ml,并计算出IC50值;

应用CCK-8实验方法检测吡咯替尼是否对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖有影响,吡咯替尼采用的药物浓度分别为0.1nmol/L、0.5nmol/L、1nmol/L、2nmol/L、5nmol/L、10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L,并计算出IC50值;

应用CCK-8实验方法检测狼毒大戟提取物对正常人乳腺细胞株MCF-10A是否具有细胞毒性作用,狼毒大戟提取物药物浓度为1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml、200mg/ml;

采用CCK-8法检测狼毒大戟提取物联合吡咯替尼对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖的影响,应用1mg/ml、5mg/ml狼毒大戟提取物分别与0.1nmol/L、0.5nmol/L、1nmol/L、2nmol/L、5nmol/L、10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L吡咯替尼联合使用,并分别计算出IC50值。

用流式检测术检测狼毒大戟提取物（1mg/ml、5mg/ml）、吡咯替尼单药（选取48h IC50浓度）以及狼毒大戟提取物联合吡咯替尼对人乳腺癌SK-BR-3细胞株细胞周期以及凋亡的影响。

结果:1.不同浓度狼毒大戟提取物与吡咯替尼显著抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖,并且呈浓度和时间相关性。狼毒大戟提取物IC5024h为:68.20mg/ml、IC5048h为:55.60mg/ml;吡咯替尼IC5024h为:7.12nmol/L、IC5048h为:4.07nmol/L。

2.不同浓度的狼毒大戟提取物作用于正常人乳腺细胞株MCF-10A 24h、48h后,与对照组相比,1mg/ml、5mg/ml狼毒大戟提取物对细胞存活率无明显变化（24h细胞存活率分别为99.77%、98.73%;48h细胞存活率分别为96.71%、95.41%）,不具有显著细胞毒性作用。

参考文献

[1]Cancer statistics in China,2015[J].Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Peter D.Baade,Siwei Zhang,Hongmei Zeng,Freddie Bray,Ahmedin Jemal,Xue Qin Yu,Jie He.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2016(2)

[2]Multi-drug resistance in cancer chemotherapeutics:Mechanisms and lab approaches[J].Qiong Wu,Zhiping Yang,Yongzhan Nie,Yongquan Shi,Daiming Fan.Cancer Letters.2014(2)

[3]The Pathophysiology of Epithelial-Mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-βin Normal and Malignant Mammary Epithelial Cells[J].Molly A.Taylor,Jenny G.Parvani,William P.Schiemann.Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia.2010(2)

[4]Aptamer and 5-fluorouracil dual-loading Ag 2 S quantum dots used as a sensitive label-free probe for near-infrared photoluminescence turn-on detection of CA125 antigen[J].Hui Jin,Rijun Gui,Jun Gong,Wenxue Huang.Biosensors and Bioelectronics.2017

[5]王冰.狼毒大戟提取物联合吡咯替尼对人乳腺癌SK-BR-3细胞株的生长抑制作用[D].辽宁中医药大学,2020.