PIEC猪髋动脉内皮细胞的应用

背景^[1-3]

PIEC猪髋动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来；细胞经CD31/vWF免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

猪动脉内皮细胞分离自髋动脉组织的上皮细胞样贴壁细胞，生长培养：RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S；培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%；温度：37℃。

PIEC猪髋动脉内皮细胞

内皮细胞也称为血管内皮细胞，通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，它形成血管的内壁。它们具有吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，还参与机体免疫活动功能。内皮细胞较间皮细胞小，排列紧密。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最小的微血管。

传代方法：

1.尽量吸干净T25瓶原培养基；

2.加3-4ml常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；

4.将培养瓶放入37度培养箱消化；

5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；

6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；

7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；

8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；

应用^[4][5]

用于静电纺丝素蛋白/BAMG搭载VEGF构建复合组织工程支架研究

采用辊筒接收制备了多层有序复合支架材料。干态下湿处理的有序共混和同轴复合支架材料的断裂强度和断裂伸长率分别达到22.7MPa和18.8%、21.0MPa和13.2%，湿态下二者相应的断裂强度和断裂伸长率则为5.9MPa和87.2%、5.5MPa和84.5%；相比于无序复合支架，有序复合支架材料的力学性能显著提高。

干湿态下，有序共混复合支架材料的缝合强力最高达4.3N和1.9N；同轴复合支架材料的缝合强力则为4.1N和1.8N，两种支架材料的缝合强力均已接近或超出了组织工程支架材料的应用标准（2N）。

VEGF缓释实验表明共混和同轴两种纺丝方式均可以成功搭载药物，并进行释放；释放时间达两周以上，且MTT增殖实验表明释放的VEGF可保持活性7天以上。此外，相比于乙醇浸泡，湿处理更有利于保持VEGF其活性以及提高复合支架力学性能。

细胞增殖实验表明，无序和有序支架均具有良好的生物相容性，猪髋动脉内皮细胞PIECs（porcine iliac endothelial cells）在载药支架材料的生长、增殖比非载药支架上好；有序纤维支架材料还可以有效诱导细胞沿着纤维取向方向生长。

此外，细胞不仅可以粘附在支架表面上生长，还可以深入材料内部生长，更有利于组织的修复。这些说明载药复合支架材料有望广泛应用于组织工程中。

参考文献

[1]Therapeutic efficacy of antibiotic-loaded gelatin microsphere/silk fibroin scaffolds in infected full-thickness burns[J].Yong Lan,Weichang Li,Yanpeng Jiao,Rui Guo,Yi Zhang,Wei Xue,Yuanming Zhang.Acta Biomaterialia.2014(7)

[2]A novel electrospun-aligned nanoyarn-reinforced nanofibrous scaffold for tendon tissue engineering[J].Chengwei Yang,Guoying Deng,Weiming Chen,Xiaojian Ye,Xiumei Mo.Colloids and Surfaces B:Biointerfaces.2014

[3]Tunable Structures and Properties of Electrospun Regenerated Silk Fibroin Mats Annealed in Water Vapor at Different Times and Temperatures[J].Xiangyu Huang,Suna Fan,Alhadi Ibrahim Mohammed Altayp,Yaopeng Zhang,Huili Shao,Xuechao Hu,Minkai Xie,Yuemin Xu,Huarong Nie.Journal of Nanomaterials.2014

[4]Performance of a multilayered small-diameter vascular scaffold dual-loaded with VEGF and PDGF[J].Fengxuan Han,Xiaoling Jia,Dongdong Dai,Xiaoling Yang,Jin Zhao,Yunhui Zhao,Yubo Fan,Xiaoyan Yuan.Biomaterials.2013(30)

[5]李赵波.静电纺丝素蛋白/BAMG搭载VEGF构建复合组织工程支架[D].东华大学,2014.