T24人膀胱移行细胞癌细胞的应用

背景^[1-3]

T24人膀胱移行细胞癌细胞源自一位81岁白人女性患者的膀胱移行细胞癌组织。该移行细胞癌患者的白细胞和血清对T24细胞及相关细胞株有细胞毒性。该细胞倍增时间为19小时，含癌基因ras(H-ras)，表达肿瘤特有抗原。

T24人膀胱移行细胞癌细胞

培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对膀胱移行细胞癌T24细胞的抑制作用及其抑制机理的研究

选定c-Src作为潜在的肿瘤基因治疗靶点,试图通过此项研究,了解c-Src在膀胱移行细胞癌中的表达情况,了解c-Src蛋白产物与膀胱移行细胞癌的发生、发展、转移及预后的相关性。

在此基础上,研究Src酪氨酸激酶抑制剂对膀胱移行细胞癌T24细胞生长、增殖的影响,探讨酪氨酸激酶抑制剂对Src蛋白及其下游信号的作用,论证Src蛋白作为膀胱移行细胞癌分子靶向治疗的潜在靶点的可能性。

探讨c-Src蛋白在膀胱移行细胞癌（BTCC）上的表达及其意义

方法:用半定量RT-PCR的方法检测36例膀胱移行细胞癌（BTCC）中c-Src的表达情况,并分析其与膀胱移行细胞癌（BTCC）临床病理因素的关系。同时取癌旁组织22例及正常膀胱组织18例做对照。

结果:BTCC（分浅表性膀胱癌和肌层侵润性膀胱癌两组）组织中c-SrcmRNA表达比值（c-Src/β—actin）分别为0.311±0.014、0.252±0.024,明显高于癌旁组织中的0.150±0.032和正常膀胱组织的0.144±0.028,组间存在显著差异（P＜0.05）。

c-Src在复发患者中的表达比值（c-Src/β-actin）为0.329±0.103,明显高于初发患者中的表达比值（c-Src/β-actin）0.288±0.121,组间存在显著差异（P＜0.05）具有统计学意义;c-Src在膀胱移行细胞癌（BTCC）G1、G2、G3组其表达比值（c-Src/β-actin）分别为0.289±0.128,0.302±0.104和0.325±0.098存在明显差异,G1组、G2分别与G3组比较,组间存在显著差异（P＜0.05）具有统计学意义。

结论:1、c-Src及其蛋白在膀胱移行细胞癌（BTCC）存在明显高表达。

参考文献

[1]The protein kinase B/Akt signalling pathway in human malignancy[J].Karleen M Nicholson,Neil G Anderson.Cellular Signalling.2002(5)

[2]Inhibition of p38 mitogen activated protein kinase increases lipopolysaccharide induced inhibition of apoptosis in neutrophils by activating extracellular signal-regulated kinase[J].Ketan Sheth,John Friel,Brian Nolan,Paul Bankey.Surgery.2001(2)

[3]Adhesion-linked kinases in cancer;emphasis on Src,focal adhesion kinase and PI 3-kinase[J].R.J.Jones,V.G.Brunton,M.C.Frame.European Journal of Cancer.2000(13)

[4]New Roles for Src Kinases in Control of Cell Survival and Angiogenesis[J].Joseph Schlessinger.Cell.2000(3)

[5]龙永其.Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对膀胱移行细胞癌T24细胞的抑制作用及其抑制机理的研究[D].中南大学,2009.