山茶花提取物的提取方法

山茶花，又名茶花，为山茶科山茶属植物，因其植株形姿优美，花形艳丽缤纷，受到世界园艺界的珍视，是中国传统的观赏花卉，亦是世界名贵花木之一。山茶花含有丰富的黄 酮类、皂苷类、多酚类化合物，具有优异的抗氧化抗自由基的功效，以其制备的化妆品具有抗自由基、抗衰、淡斑、保湿、防晒的效果。山茶花具有诸多功效，在中国广泛种植，资源充足，但大多用于城市景观绿化，供人们欣赏，每年山茶花的花卉因凋零未被利用而白白浪费。因此如何获得高纯度的山茶花提取物成为了研究热点。

提取方法

目前，山茶花的提取多采用有机溶剂高温回流提取或蒸馏提取或直接用水做溶剂高温提取，这两种方法都需要进行高温长时间蒸煮。上述提取方法及提取物存在以下缺点： 山茶花中存在较多的杂质，所得的提取液中抗氧化、抗自由基功效活性成分低，不利于后续 工序的精制纯化，每个批次提取物的成分也不确定;工序多、工艺繁琐复杂、所需时间较长； 安全性低，生产过程中使用大量有机溶剂，极易残留在成品中，不利于身体健康;会造成环 境污染，生产过程中会向环境中排放大量有机溶剂。

要推广使用山茶花的活性物质，必须能够有效地提取到大量的山茶花提取物。现 有植物提取一般是采用植株进行提取，但植株生长需要多年时间，而且受到地域，气候，季 节以及病虫害等的影响与威胁，其提取物品质不稳定，其效果难以控制。因此，研究如何获 取大量的品质稳定的山茶花提取物是推广应用山茶花提取物必须解决的难题。

一种山茶花提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤： 

1、 山茶花单细胞的分离:无菌山茶花中加入MS(Murashige and Skoog)培养基中培 养，并加入纤维素酶和果胶酶进行酶解，调pH至5〜6，在26〜30°C、30〜60rpm条件下，消化2 〜4小时，过滤除杂，滤液离心去上清液，获得山茶花细胞株； 

2、 山茶花细胞的培养:将获得的山茶花单细胞株接种到含有2,4-D、6-BA的MS培养基 中，23〜27 °C黑暗培养，直至长出愈伤组织;将得到的愈伤组织分割成小块，转入到MS液体 培养基中置于发酵罐中进行悬浮培养，通入过滤空气且速率为0.04〜0.06m3/s，在24〜28 °C、120〜160rpm的条件下培养7〜10天。