二甲基苯胺单加氧酶5抗体的应用

背景^[1-3]

二甲基苯胺单加氧酶5抗体是一类可以特异性结合二甲基苯胺单加氧酶5的一类多克隆抗体，主要用于体外检测二甲基苯胺单加氧酶5的免疫学实验。

二甲基苯胺单加氧酶是一类重要的药物代谢酶，可催化各种含氮，硫和磷的异生物（如治疗药物，膳食化合物，农药）的NADPH依赖性氧合。人类FMO基因家族由5个基因和多个假基因组成。FMO成员具有独特的发育和组织特异性表达模式。这种FMO3基因的表达是成年肝脏中表达的主要FMO，在个体之间的差异可能高达20倍。FMO3表达水平的这种个体间差异可能会对异生质代谢的速率产生重大影响。这种跨膜蛋白位于许多组织的内质网中，该基因的可变剪接导致编码不同同工型的多个转录变体。该基因中的突变会引起三甲胺症（TMAu），其特征在于未代谢的三甲胺的积累和排泄以及独特的体味。在健康个体中，三甲胺主要转化为无味的三甲胺N-氧化物。

二甲基苯胺单加氧酶5免疫组化

二甲基苯胺单加氧酶5属于I相代谢的药物代谢酶，是一组依赖黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）和分子氧的微粒体酶,是重要的肝内药物和化学异物代谢酶,可催化含氮、硫、磷、硒和其他亲核杂原子的化合物和药物的氧化。

应用^[4][5]

用于生物钟调控代谢酶FMO5节律表达的研究

考察小鼠肝脏FMO5表达和活性的昼夜节律性,并探讨生物钟基因（Bmal1、Rev-erbα和E4bp4/Dbp）在其昼夜节律产生中的潜在作用。

方法:1.以野生型小鼠为研究对象,收集小鼠肝脏。采用实时荧光定量核酸扩增检测（qPCR）和蛋白质免疫印迹技术（Western blotting）,检测小鼠肝脏中FMO5在六个昼夜时点（ZT2、ZT6、ZT10、ZT14、ZT18和ZT22）的表达。此外,采用高浓度血清刺激法,检测Fmo5在细胞水平的周期性表达。并采用体外肝微粒体孵育实验,进行不同时间点小鼠肝脏FMO5活性评价。

2. 用野生型小鼠进行己酮可可碱（PTX）的时辰药代动力学研究。分别于不同昼夜时点（ZT2和ZT14）腹腔注射给予小鼠PTX（50 mg/kg）,并于设定时间点收集血浆和肝脏样品,采用UPLC-QTOF/MS法测定血浆及肝脏中药物浓度。基于非房室模型,评价PTX及其代谢物PTX-M的体内药代动力学参数及组织分布的时辰差异。

3. 以Bmal1-/-、Rev-erbα-/-和E4bp4-/-以及野生型同窝对照(Bmal1+/+、Rev-erbα+/+和E4bp4+/+)小鼠为研究对象,采用qPCR和Western blotting检测小鼠肝脏中FMO5在六个昼夜时点的表达,评价生物钟基因Bmal1、Rev-erbα和E4bp4对FMO5节律表达的影响。

4. 采用细胞转染技术,高表达或敲低小鼠原代肝细胞和/或肝癌细胞中Bmal1、Rev-erbα和E4bp4的表达,在体外考察生物钟基因Bmal1、Rev-erbα和E4bp4对FMO5节律表达的影响。

5.采用荧光素酶报告基因和染色质免疫沉淀实验（Ch IP）解析生物钟基因对Fmo5的分子调控机制。

参考文献

[1]Chronopharmacological targeting of Rev-erbαby puerarin alleviates hyperhomocysteinemia in mice[J].Min Chen,Cui Zhou,Haiman Xu,Tianpeng Zhang,Baojian Wu.Biomedicine&Pharmacotherapy.2020(C)

[2]Circadian pharmacological effects of berberine on chronic colitis in mice:Role of the clock component Rev-erbα[J].Ziyue Zhou,Yanke Lin,Lu Gao,Zemin Yang,Shuai Wang,Baojian Wu.Biochemical Pharmacology.2020(C)

[3]Identification of rhythmic human CYPs and their circadian regulators using synchronized hepatoma cells.[J].Chen Min,Zhou Cui,Zhang Tianpeng,Wu Baojian.Xenobiotica;the fate of foreign compounds in biological systems.2020(9)

[4]Role of the CLOCK protein in liver detoxification.[J].Zhao Mengjing,Zhao Huan,Deng Jiangming,Guo Lianxia,Wu Baojian.British journal of pharmacology.2019(24)

[5]陈敏.生物钟调控代谢酶FMO5节律表达的研究[D].暨南大学,2020.