血管活性肠肽受体-1抗体的应用

背景^[1-3]

血管活性肠肽受体-1抗体是一类可以特异性结合血管活性肠肽受体-1蛋白的多克隆抗体，主要用于血管活性肠肽受体-1的体外检测。

人血管活性肠肽受体1（VIPR1R）是B类GPCR成员，广泛分布于中枢神经系统的大脑皮质和下丘脑。在生物体内，VIP1R在心脏节律、学习、记忆、焦虑以及机体对应激和脑损伤应答等方面发挥着重要调节作用。开发靶向VIP1R的多肽和小分子药物对睡眠紊乱、中风、神经退行性疾病以及和老龄化相关的记忆损伤等疾病的治疗具有积极作用。

血管活性肠肽受体-1免疫组化图

血管活性肠肽（VIP），又名舒血管肠肽，是神经递质的一种，存在于中枢神经和肠神经系统中。VIP由28个氨基酸组成，主要是由肠道神经元释放。VIP在生物体内具有双重作用，既是胃肠道激素，又是神经肽。VIP功能多样，如扩张心、脑、肝血管，调节脑血流量，降低肺动脉压，降低血压，松弛支气管平滑肌，调节中枢体温、睡眠，刺激催乳素释放等。在消化系统的主要作用是舒张肠道平滑肌，并使食管下段括约肌、Oddi括约肌、肠道平滑肌、肛门内括约肌松弛。因此VIP水平的变化与临床多种疾病相关，尤其与胃肠道疾病关系密切，是胃肠道疾病研究的重要指标。

应用^[4][5]

用于血管活性肠肽在黑色素生成过程中的作用及相关机制研究

探讨血管活性肠肽在黑色素生成过程中的作用以及相关机制。

方法:1利用VIP处理小鼠黑素瘤B16F10细胞,并以不同浓度分析细胞活性、黑色素含量,在不同时间段测定酪氨酸酶活性;

2分别利用RNA逆转录合成cDNA试验、实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）以及蛋白免疫印迹试验（Western blotting）来检测黑色素生成关键酶-酪氨酸酶（Tyrosinase）以及小眼畸形相关转录因子（microphthalmia associated transcription factor,MITF）基因的mRNA及蛋白质表达水平;

3通过Western blotting法在不同时间段对VIP诱导的信号通路相关蛋白PKA、CREB、p38MAPK、AKT、ERK1/2等磷酸化及总蛋白表达水平进行检测;

4利用选择性PKA抑制剂H89抑制cAMP-PKA-CREB信号通路,观察黑色素生成含量以及MITF、Tyrosinase等蛋白的表达变化,进一步确认有效的由VIP诱导的黑色素生成相关信号通路;

5通过Western blotting法检测小鼠黑素瘤B16F10细胞中VIP受体的表达情况;

6利用特异性VIPR1/R2小干扰RNA下调相应VIP受体的表达,观察黑色素生成含量以及Tyrosinase蛋白的表达变化,检测VIP诱导的促黑色素生成过程中有效的VIP受体信号通路；

7通过黑色素生成含量测定以及Western blotting法检测Tyrosinase、MITF等相关蛋白的表达,进一步在人表皮黑色素细胞中验证VIP在黑色素生成过程中的作用。

参考文献

[1]Pratol,an O-Methylated Flavone,Induces Melanogenesis in B16F10 Melanoma Cells via p-p38 and p-JNK Upregulation[J].You Chul Chung,Seoyeon Kim,Jin Hwa Kim,Geun Soo Lee,Jung No Lee,Nam Ho Lee,Chang Gu Hyun.Molecules.2017(10)

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[3]Secreted Frizzled-Related Protein 2（sFRP2）Functions as a Melanogenic Stimulator;the Role of sFRP2 in UV-Induced Hyperpigmentary Disorders[J].Misun Kim,Jae Ho Han,Jang-Hee Kim,Tae Jun Park,Hee Young Kang.Journal of Investigative Dermatology.2016(1)

[4]Baicalin-induced Akt activation decreases melanogenesis through downregulation of microphthalmia-associated transcription factor and tyrosinase[J].Hyo-Soon Jeong,Go Eun Gu,Ah Reum Jo,Joon Seok Bang,Hye-Young Yun,Kwang Jin Baek,Nyoun Soo Kwon,Kyoung-Chan Park,Dong-Seok Kim.European Journal of Pharmacology.2015

[5]元星花.血管活性肠肽在黑色素生成过程中的作用及相关机制研究[D].延边大学,2018.