重组人白细胞介素18抗体的应用

背景^[1-3]

重组人白细胞介素18抗体是一类可以特异性结合人白细胞介素18蛋白的多克隆抗体，主要用于体外检测人白细胞介素18蛋白的实验。

白细胞介素，简称白介素，是指在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子，它和血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。

重组人白细胞介素18

白细胞介素18（Interleukin 18，IL-18）是新近克隆的白细胞介素家族的最新成员，是IFN-γ的强诱导因子，在Th1型免疫应答中具有重要作用。采用逆转录PCR从人单核细胞系THP-1中获得了人成熟IL-18（hIL-18）cDNA，测序鉴定正确的片段经EcoR I/BamH I酶切后克隆入原核表达载体pBV220，再转化至大肠杆菌DH5α高效表达，经纯化获得了有活性的重组hIL-18蛋白。

白细胞介素18（Interleukin 18，IL-18）是Okamura等1995年从热灭活的Propionibacterium acnes（痤疮丙酸杆菌）和LPS联合处理过的小鼠肝脏提取物中分离纯化并克隆到的一种IFN-γ诱导因子，起初发现其具有诱导T细胞产生IFN-γ，因此曾叫γ干扰素诱导因子（Interferon－gamma－inducingfactor，IGIF），是调节Th1细胞功能的新型细胞因子，其生物学作用与IL-12有许多相似之处。

IL-18主要由单核巨噬细胞产生，以单体形式发挥作用，能诱导T细胞产生IFN-γ，促进NK细胞杀伤治性，与IL-12具有协同作用；并能促进T细胞分泌IL-2和GM-CSF，抑制其产生IL-4和IL-10。IL-18在感染炎症、自身免疫性疾病等过程中起重要作用，对其的研究可能有助于感染、肿瘤、过敏性疾病等的治疗。IL-18能激发Th1型免疫应答，在感染炎症、自身免疫性疾病、过敏性疾病、肿瘤等病理过程中起重要作用，对其的研究可能有助于这些疾病的治疗。

应用^[4][5]

用于IL-18的重组、表达及其抗肿瘤作用的研究

人白细胞介素18的基因克隆与原核表达采用RTFCR从人单核细胞THP上中克隆了人白细胞介素18uL 18)对应于成熟蛋白分子的编码cDNA，经测序鉴定后在大肠杆菌中高效表达和纯化了有活性的人ILIS。

在设计PCR引物时去掉了人ILq的引导序列，同时也去掉了其cDNA的3’端非编码区。在编码成熟人IL-18上个氨基酸的密码子前加了起始蛋氨酸的密码子，保证其在大肠杆菌中的原核表达。

由于采用了高效的双酶切定向克隆，很容易地得到了阳性的重组子。将人几l8 cDNA克隆至原核表达载体pBV220的EcoRI和BalnHI位点，使IL1 CDNA置于P少启动子的控制之下，在启动子上游有温度敏感的转录遏制物CIts857存在，在热诱导条件下去遏制，使得IL-18基因开放表达。将重组子导入大肠杆菌DH5a，建立人n4原核表达的工程菌，并对工程菌的形态学、革兰氏染色特征、质粒遗传稳定性和靶蛋白表达水平的稳定性进行检测。

参考文献

[1]Immunoadjuvant activities of a recombinant chicken IL-12 in chickens vaccinated with Newcastle disease virus recombinant HN protein[J].Bor Sheu Su,Hsien Sheng Yin,Hua Hsien Chiu,Li Hsiang Hung,Ji Ping Huang,Jui Hung Shien,Long Huw Lee.Veterinary Microbiology.2011(3)

[2]Adjuvant effects of chicken interleukin-18 in avian Newcastle disease vaccine[J].Li-Hsiang Hung,Hsin-Pei Li,Yi-Yang Lien,Mei-Li Wu,Hso-Chi Chaung.Vaccine.2009(5)

[3]Genomic Organization and Regulation of the Human Interleukin‐18 Gene[J].U.Kalina,K.Ballas,N.Koyama,D.Kauschat,C.Miething,J.Arnemann,H.Martin,D.Hoelzer,O.G.Ottmann.Scandinavian Journal of Immunology.2008(6)

[4]2-Deoxyglucose:An anticancer and antiviral therapeutic,but not any more a low glucose mimetic[J].Hyun Tae Kang,Eun Seong Hwang.Life Sciences.2005(12)

[5]顾申.IL-18的重组、表达及其抗肿瘤作用的研究[D].第二军医大学,2001.