磷酸酯酶-2AC抗体的应用

背景^[1-3]

磷酸酯酶-2AC抗体是一类可以特异性结合磷酸酯酶-2AC蛋白的多克隆抗体，主要用于磷酸酯酶-2AC蛋白的体外免疫学检测。

多克隆抗体是由异源抗原（大分子抗原、半抗原偶联物）刺激机体产生免疫反应，有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。多克隆抗体由于其可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应，制备时间短，成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面。

磷酸酯酶-2AC

磷酸酯酶通常是指催化正磷酸酯化合物水解的酶类总称，或者说是水解磷酸酯及多聚磷酸化合物酶类的总称。

磷酸酯酶能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基。磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。在许多生物体中都普遍存在的一种磷酸酶是碱性磷酸酶。

磷酸酶与激酶或磷酸化酶的磷酸化作用正相反。磷酸化可以使一个酶被激活或失活(如，激酶信号通路)，也可以使一个蛋白－蛋白间相互作用发生(如SH3结构域)；因此，磷酸酶是许多信号转导通路控制磷酸化所必需的。值得一提的是，磷酸化或去磷酸化并不一定对应着酶的激活或抑制，而且一些酶有多个磷酸化位点参与激活或抑制的调控。

应用^[4][5]

用于锌离子对蛋白磷酸酯酶2A的调节及其在阿尔茨海默病中的作用研究

阐明锌离子是否通过调节PP2A活性促进tau蛋白异常过度磷酸化及调节PP2A活性的机制。

方法：实验在整体和细胞水平进行。整体水平采用雄性SD大鼠，侧脑室定位注射硫酸锌，分组如下：生理盐水对照组、30mM硫酸锌给药组，30mM硫酸锌给药+锌离子特异性螯合剂CQ腹腔注射组。

在侧脑室注射6天后，麻醉取脑分离海马组织匀浆，用免疫印迹检测tau磷酸化水平的变化，以及PP2Ac Y307磷酸化水平的变化,检测PP2A的活性；细胞水平采用小鼠成神经瘤N2a细胞系，用100μM硫酸锌处理3小时后提取蛋白，同样方法检测PP2Ac Y307磷酸化及tau磷酸化水平。

同时在细胞水平给予PP2或DES预孵育30min或转染野生型PP2A和突变性PP2A，在用用100μM硫酸锌处理3小时后提取蛋白，同样方法检测PP2Ac磷酸化及tau磷酸化水平。

在转基因动物水平，采用转人tau的转基因小鼠，锌离子螯合剂CQ灌胃35天，检测PP2Ac磷酸化及tau磷酸化水平及可溶性tau和不溶性tau的变化情况。

结果：将锌离子直接注射入整体动物侧脑室，6天后海马PP2Ac Y307磷酸化水平明显增高，伴随PP2A活性下降，tau蛋白在多个丝氨酸/苏氨酸位点如Ser214、Thr205、Ser396、Ser404发生过度磷酸化；给动物同时腹腔注射锌离子螯合剂CQ,则可部分逆转PP2Ac Y307磷酸化水平和PP2A活性的抑制。

用硫酸锌处理小鼠成神经瘤N2a细胞，同样导致PP2Ac发生酪氨酸磷酸化修饰和活性下降，tau蛋白在多个位点发生过度磷酸化,伴随Src失活性磷酸化位点酪氨酸529（Tyr529）磷酸化水平降低，Src激活。

给予锌同时给予PP2A的激动剂或过表达野生型PP2A可逆转锌导致的PP2Ac活性下降以及tau蛋白的过度磷酸化。给予Src家族的特异性抑制剂PP2同样可部分逆转PP2Ac Y307磷酸化和PP2A活性的抑制以及tau蛋白的磷酸化。

参考文献

[1]Activation of protein phosphatase2A by the Fe2+/ascorbate system.Yu,J.S.Journal of Biochemistry.1998

[2]Glycogen synthase kinase 3 beta is identical to tau protein kinase I generating several epitopes of paired helical filaments.Ishiguro K,Shiratsuchi A,Sato S,Omori A,Arioka M,Kobayashi S,Uchida T,Imahori K.FEBS Letters.1993

[3]The calmodulin-dependent activation and deactivation of the phosphoprotein phosphatase,calcineurin,and the effect of nucleotides,pyrophosphate,and divalent metal ions.Identification of calcineurin as a Zn and Fe metalloenzyme.M M King,C Y Hua.Journal of Biological Chemistry.1984

[4]Dynamics and diversity in autophagy mechanisms:lessons from yeast.Nakatogawa Hitoshi,Suzuki Kuninori,Kamada Yoshiaki,Ohsumi Yoshinori.Nature reviews.Molecular cell biology.2009

[5]熊艳.锌离子对蛋白磷酸酯酶2A的调节及其在阿尔茨海默病中的作用[D].华中科技大学,2013.