李斯特氏菌显色培养基的应用

背景^[1-3]

李斯特氏菌显色培养基可快速检测食品和药品中单增李斯特氏菌。阴性结果可在3天内检测完成。单增李斯特氏菌显蓝色，菌落周围有一不透明环。蛋白胨提供氮源和氨基酸，氯化钠维持渗透压，琼脂是凝固剂，氯化锂抑制革兰氏阴性菌生长，抑菌剂抑制除李氏菌外的革兰氏阳性菌生长。

李斯特菌属(Listeria．spp)经常存在于各种动物和环境中，来源于土壤和水中的李斯特菌可能污染人类消费品，特别是即食食品。与其他常见致病菌相比，单核细胞增生李斯特菌的感染率虽然较低，但致死率高达20%～50%。因此，高效精确地从食品等样品中分离和鉴别出单核细胞增生李斯特菌，对食品质量控制和疾病预防治疗有重要意义。

李斯特氏菌显色培养基

用法：称取基础培养基14.2g加入180ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌；另取1.2g李斯特氏菌添加剂，加入20ml无菌水，并加入一些玻璃球，不停振动1-2min，使其混合均匀，将二者分别于121℃高压灭菌15 min。冷至50℃左右时，把李斯特氏菌添加剂加入基础培养基中，并加入复溶后的李斯特氏菌抑菌剂1支，混匀，倾入无菌平皿。使培养基的厚度约为2-3mm，这样有利观察不透明环。

操作步骤：

使用前，把制备好的培养基放置室温10-20分钟。

1、按SN标准、GB标准、FDA标准、ISO标准或其它标准制备样品液；

2、把样品液加入李氏增菌肉汤(LB1、LB2)中增菌；或把样品液和Half-Fraser增菌液按照1：10的比例混匀，30℃培养24小时；或其它增菌液中增菌培养;

3、取一环增菌液划线接种到李斯特氏菌显色培养基上，36℃±1℃培养24-48小时。

应用^[4][5]

用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的毒力研究

收集熟肉制品、豆制品、奶及奶制品、蔬菜、水果、速冻食品、水产品、生肉等8类食品共1645份样品,进行单增李斯特氏菌的分离与鉴定。

以单增李斯特氏菌相关毒力基因（hly、plcB、inlA、inlB、inlC、inlJ、prfA）设计引物,检测49株单增李斯特氏菌食品分离株中的毒力基因携带率,并进行小鼠毒力实验,分析毒力基因携带率与单增李斯特氏菌毒力的相关性,建立PCR技术鉴别单增李斯特氏菌强毒株和弱毒株或无毒株的方法。

结果：单增李斯特氏菌的总检出率为3.0%,总检出率相比其他地区偏低。在8类食品样品中,生肉中单增李斯特氏菌的检出率最高,为5.8%,其次是熟肉制品、水产品,检出率分别为3.3%和2.9%。49株分离株中有19株7种毒力基因检测结果均为阳性,7株hly基因阴性,4株plcB基因阴性,4株prfA基因阴性。5株inlA、inlB基因阴性,13株inlC基因阴性,12株inlJ基因阴性,1株inlA、inlB、inlC、inlJ基因均为阴性。

4株分离株的毒力与标准菌株ATCC191161E相当,小鼠LD50在1.2×108-6.0×108CFU/mL之间,为强毒株。筛选出弱毒株09-132,LD50为1.7×1011CFU/mL。

结论：ALOA显色培养基无论是从疑似菌检出概率还是总的检出率来说,都是的：PALCAM平板适于熟肉制品中单增李斯特氏菌检测；为提高检出率使用一种以上的选择性培养基进行分离。

参考文献

[1]A New Perspective on Listeria monocytogenes Evolution[J].Marie Ragon,Thierry Wirth,Florian Hollandt,Rachel Lavenir,Marc Lecuit,Alban Le Monnier,Sylvain Brisse.PLOS Pathogens.2008(9)

[2]Molecular characteristics and virulence potential of Listeria monocytogenes isolates from Chinese food systems[J].Jianshun Chen,Xiaokai Luo,Lingli Jiang,Peijie Jin,Wei Wei,Dongyou Liu,Weihuan Fang.Food Microbiology.2008(1)

[3]Inhibition of ROCK activity allows InlF‐mediated invasion and increased virulence of Listeria monocytogenes[J].MarieluiseKirchner.Molecular Microbiology.2008(3)

[4]Internalins:a complex family of leucine-rich repeat-containing proteins in Listeria monocytogenes[J].H.Bierne,C.Sabet,N.Personnic,P.Cossart.Microbes and Infection.2007(10)

[5]于丰宇.食品中单核细胞增生李斯特氏菌的毒力研究[D].西南大学,2011.