谷氨酸脱氢酶2抗体的应用

背景^[1-3]

谷氨酸脱氢酶2抗体是可以特异性结合谷氨酸脱氢酶2蛋白的一类多克隆抗体，主要用于体外检测谷氨酸脱氢酶2蛋白的免疫学实验。

谷氨酸脱氢酶(GLDH或GDH)是线粒体酶，主要存在于肝脏、心肌及肾脏，少量存在于脑、骨骼肌及白细胞中。GDH除催化L-谷氨酸脱氢外，还具有催化其他氨基酸如L-缬氨酸、L-2-氨基丁酸及L-亮氨酸脱氨。其测定方法主要是连续监测法。

谷氨酸脱氢酶2

谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase）是一种催化使氨还原性地固定到α-酮戊二酸上形成谷氨酸反应的酶。EC．1．1．1．3[NAD（P）]1．1．1．4（NADP）。α-酮戊二酸+NH3+NADH+H+→谷氨酸+NAD+它广泛分布于生物中，在动物，存在于线粒体中。虽然反应是可逆的，但平衡具有朝向合成谷氨酸的倾向。因物种的不同，辅酶的特异性有所不同，在植物中是NAD，酵母是NADP，动物中虽不论那种辅酶都有作用。但NAD则较其他辅酶的效力高出数倍。反应可被ADP、GDP促进，而被ATP、GTP等抑制。

牛肝脏的酶，分子量约33万6千，由6个亚基组成，有时，可进一步形成多聚合物。在动物中，该酶在氮素代谢中起着中心作用，可将氨固定形成谷氨酸，氨基被用于许多其他氨基酸的合成中。对底物的特异性并不太高，对丙氨酸也稍有作用，但其意义尚不清楚。

应用^[4][5]

用于谷氨酸脱氢酶在细菌表面展示系统的构建及其在谷氨酸检测中的应用研究

以来自于菌株Thermococcus waiotapuensis的谷氨酸脱氢酶基因为目的基因,以冰核蛋白N端结构域为锚定蛋白构建了表达载体,结果表明谷氨酸脱氢酶成功展示在大肠杆菌细胞表面,说明冰核蛋白N端结构域对来自于该菌的谷氨酸脱氢酶有很好的分泌展示功能。

这是谷氨酸脱氢酶首次在大肠杆菌表面展示,为微生物表面展示技术应用于生物传感器、食品检测、医药行业等领域提供了理论研究基础和实际应用生物材料。

成果：1.B.subtilis中谷氨酸脱氢酶表面展示系统的构建首先以来自于B.subtilis的谷氨酸脱氢酶基因为目的基因,以冰核蛋白N端结构域为锚定蛋白,分别构建了表达载体pET-Inp-gldh、pET-Inp-gldhT和pACY-Inp-gldh,将其转入大肠杆菌表达菌株。

通过SDS-PAGE和酶活测定对蛋白表达进行了定位分析,发现融合蛋白在大肠杆菌细胞中以无活性的包涵体形式表达,说明来源于该菌的谷氨酸脱氢酶没有展示到到大肠杆菌细胞表面。

来自于B.subtilis的谷氨酸脱氢酶基因的表达在有无his-tag标签表达的情况下均以包涵体形式被表达；表达载体pET28a（+）和pACYCDuet-1对来自于该菌的谷氨酸脱氢酶的表达效果相同,都以包涵体形式表达：质粒pET-Inp-gldh和pACY-Inp-gldh转入表达菌株E.coli BL21（DE3）、E.coli transB（DE3）、E.coli transetta（DE3）、E.coli BL21（DE3）plys后,经诱导表达产生的融合蛋白都为包涵体,说明以上各表达菌株对来自于该菌的谷氨酸脱氢酶表达效果一致。

2.T.waiotapuensis中谷氨酸脱氢酶表面展示系统的构建以T.waiotapuensis中编码谷氨酸脱氢酶的基因为目的基因,以冰核蛋白N端结构域为锚定蛋白构建了表达载体pTInaPb-N-Gldh,将其转入E.coli BL21（DE3）中,诱导表达后的菌株进行SDS-PAGE电泳和酶活测定分析,发现来自于该菌的谷氨酸脱氢酶成功展示在大肠杆菌细胞表面。

参考文献

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[5]宋建侠.谷氨酸脱氢酶在细菌表面展示系统的构建及其在谷氨酸检测中的应用[D].中国海洋大学,2015.