血清瓶的应用

背景^[1-3]

血清瓶由低析出硼硅玻璃制造，无色透明瓶符合USP I型和ASTM E 438 I型标准A类要求。可在121℃高压灭菌20min，按照体积可分为125ml、250ml、500ml、1L、2L。

血清瓶是用来储存血清的容器，一般由PET材料经注拉吹工艺加工而成。培养基是细胞生长所需的营养物质，按其来源分为合成培养基和天然培养基，这两种培养基都可以用血清瓶来储存。

血清瓶

天然培养基：

使用最普遍的天然培养基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物质。与合成培养基合用，能使细胞顺利增殖生长。血清需要储存在专门的血清瓶中，在-5℃至-20℃的环境储存。

合成培养基：

合成培养基是根据细胞所需物质的种类和数量严格配制而成的，种类多、成分已知，便于对实验条件的控制。内含碳水化合物、氨基酸、脂类、无机盐、维生素、微量无素和细胞生长因子等。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足，最普遍的作法是加入小牛血清。

血清瓶形状为方形，方便抓握，耐大多数酸碱的腐蚀，脆化温度为-70℃，在-30℃时仍具有一定韧性，是良好的包装容器，无论是天然培养基还是合成培养基，都可以用血清瓶来储存。

应用^[4][5]

用于人脐血内皮祖细胞的分离、培养和鉴定及改良冻融法脱细胞血管支架的建立研究

探讨人脐血中分离并大量培养内皮祖细胞的可行性以及临床应用价值。

方法：收集蚌埠医学院附属医院妇产科足月剖腹产手术胎儿脐带血，无菌条件下放置于含有50U/ml肝素的血清瓶中，放置于4°C冰盒中保存，运送至细胞培养室，采用密度梯度离心法来获取脐带血单个核细胞，将获取的单个核细胞分成两份，加入胎牛血清M199培养基（FCS-M199）及自体血清M199培养基（AS-M199），并分别将其接种于铺设有人纤维连接蛋白（HFN）和未铺设有人纤维连接蛋白的培养皿中（标记为：F（0）、F（1）、A（0）、A（1））进一步进行体外诱导、分化以及扩增。

并观察贴壁细胞在整个诱导分化过程中的形态学变化，结合免疫组化、免疫荧光以及流式细胞仪等相关技术从不同角度对其进行鉴定。

研究结果：培养12d后，脐血单个核细胞开始出现贴壁。而在3d之后纺锤形状开始出现，此后贴壁细胞数量逐渐增多，且逐渐变成梭形。当培养至一周时，则形成周围为梭形细胞，而在中央是圆形细胞的典型集落。而在细胞培养至14d时，则出现了互相连接的细胞簇逐渐连接并形成网样结构。与此同时，随着培养时间的不断增加，长梭形细胞也开始逐渐缩短，并呈典型铺路石样改变。

贴壁细胞培养至一周之后继续观察，在铺设有人纤维连接蛋白的培养基之内的细胞数量明显较没有铺设人纤维连接蛋白的多，而在两种不同培养基的细胞数量上无明显变化。

参考文献

[1]Engineering extracellular matrix structure in 3D multiphase tissues[J].Brian M.Gillette,Ninna S.Rossen,Nikkan Das,Debra Leong,Meixin Wang,Arushi Dugar,Samuel K.Sia.Biomaterials.2011(32)

[2]Calcific myonecrosis of the lower leg:diagnosis and options of treatment[J].Keiichi Muramatsu,Koichiro Ihara,Toshihiro Seki,Takashi Imagama,Toshihiko Taguchi.Archives of Orthopaedic and Trauma Surgery.2009(7)

[3]Bioengineered Three-Layered Robust and Elastic Artery Using Hemodynamically-Equivalent Pulsatile Bioreactor[J].Kiyotaka Iwasaki,Koji Kojima,Shohta Kodama,Ana C.Paz,Melody Chambers,Mitsuo Umezu,Charles A.Vacanti.Circulation.2008(14 S)

[4]Application of elastic salmon collagen gel to uniaxial stretching culture of human umbilical vein endothelial cells[J].Toshiyuki Kanayama,Nobuhiro Nagai,Kazuo Mori,Masanobu Munekata.Journal of Bioscience and Bioengineering.2008(5)

[5]曹程程.人脐血内皮祖细胞的分离、培养和鉴定及改良冻融法脱细胞血管支架的建立[D].蚌埠医学院,2013.