尿素的几种检测方法

背景及概述^[3]

尿素别名碳酰二胺、碳酰胺、脲 。是由碳、氮、氧和氢组成的有机化合物，又称脲（与尿同音）。其化学公式为 CON2H4、(NH2)2CO 或 CN2H4O，国际非专利药品名称为 Carbamide。外观是白色晶体或粉末。它是动物蛋白质代谢后的产物，通常用作植物的氮肥。尿素在肝合成，是哺乳类动物排出的体内含氮代谢物。这代谢过程称为尿素循环。尿素是种以人工合成无机物质而得到的有机化合物。

检测方法^[1-2]

报道一、

一种尿素浓度检测方法，包括：

S1：制备标准溶液，利用购买的尿素溶液或固体尿素配制一定浓度梯度的尿素标准溶液；

S2：配制显色剂，所述显色剂为含有一定浓度二乙酰一肟和硫代氨基脲的溶液；硫代氨基脲的加入，能够使产物颜色稳定、不易褪色，从而保证了测量精度，扩大了线性动态范围，从而解决了现有的尿素浓度检测方法显色时间短、只能在实现室使用的缺陷；

S3：配制酸试剂，利用硫酸和磷酸配制酸试剂，磷酸和硫酸提供给溶液一定的缓冲区间，能够缓冲溶液酸碱度的变化；

S4：测量不同浓度尿素标准溶液的吸光度，制备标准曲线；

S5：将欲测量的尿素溶液与显色剂和酸试剂混合反应，测量产物的吸光度，代入标准曲线中，计算出尿素浓度。

较优的，所述步骤S1中，尿素标准溶液的溶剂为去离子水，浓度介于1-5mg/L。

具体的，例如可通过下述步骤配备标准溶液：

S11：在1L容量瓶中溶解0.1000g尿素于约800mL去离子水，加入0.1mL氯仿，加水定容稀释至刻度，得到100ug/mL的母液；

S12：稀释母液得到各浓度梯度的标液。

本方法中，所配制的标准溶液，既可以用于后期制备标准曲线，也可以用于仪器的自动校准。

较优的，所述显色剂中，溶剂为去离子水，二乙酰一肟的浓度介于10g/L-20g/L，硫代氨基脲的浓度介于0.1g/L-0.2g/L。

具体的，例如可通过下述步骤配备显色剂：

S21：配制二乙酰一肟溶液：称取34.44g二乙酰一肟溶于800mL去离子水中，定容至1000mL，混匀后保存于棕色瓶，避光阴凉保存；

S22：配制硫代氨基脲溶液：称取0.344g硫代氨基脲溶于1000mL去离子水中，混匀后保存于棕色瓶中；

S23：在500mL棕色瓶中，分别加入250mL二乙酰一肟和250mL硫代氨基脲溶液，混匀；有条件的，可以用140kpa高纯氦气脱气1分钟。显色剂一般有效期20d左右。

较优的，所述酸试剂中，溶剂为去离子水，硫酸的浓度介于500g/L-700g/L，磷酸的浓度介于150g/L-250g/L，且酸试剂中含有浓度介于0.03g/L-0.06g/L的氯化铁，氯化铁给溶液提供的三价铁离子能够避免反应产生的羟胺干扰。

具体的，例如可通过下述步骤配备酸试剂：

S31：在1L烧杯中，缓缓加入327mL硫酸于约500mL去离子水中；

S32：再加入128mL的85%磷酸于硫酸-水溶液中；

S33：再加入0.055g氯化铁，用去离子水定容至1000mL。

报道二、

一种乳中尿素定性检测方法，包括如下所述的步骤。

a.配制浓度为20mg/ml尿素酶溶液，以及使用乙醇配制得到质量含量为0.5%溴百里香酚蓝乙醇溶液。例如在一种示意性实施方式中，称取20mg尿素酶，加入1ml三级水，制成20mg/ml尿素酶溶液；称取0.5g溴百里香酚蓝，加入100ml乙醇，制成质量含量约为0.5%溴百里香酚蓝乙醇溶液。

b.使用奶粉和纯水配制复原乳，其中所述奶粉和所述纯水的质量比为1:7，使用现有的方法准确测量复原乳的尿素含量，以确保所述复原乳中尿素含量在正常范围内。例如在一种示意性实施方式中，称取1g奶粉加入7ml三级水，涡旋混匀，制成复原乳，用酶解法检测其中的尿素含量为0.25g/L。本领域技术人员可以理解，正常的牛乳中也含有尿素，尿素的含量一般在0.21~0.34g/L的范围内（J.S. jonker,  R.A. Kohn, R.A. Erdman, Using mile urea nitrogen to predict nitrogen excretion  and utilization efficiency in lactating dairy cows, Journal of Dairy Science,  1998,81(10):2682‑2692）。

c.配制尿素溶液，向复原乳中添加制得的尿素溶液，使得复原乳中的尿素浓度增加0.2g/L，得到阳性对照乳。例如在一种示意性实施方式中，称取0.1g尿素，加入10ml三级水，制成10g/L尿素溶液；吸取980uL复原乳，加入20uL的10g/L尿素溶液，混匀，使得复原乳中尿素浓度增加0.2g/L，即得到尿素含量为0.45g/L阳性对照乳。当然也可以配制其他浓度的尿素溶液，只要改变加入尿素溶液的量，保证复原乳中尿素的浓度增加0.2g/L即可。

d.各取1mL待测乳和阳性对照乳，离心处理后分别取上层清液，均加入40uL尿素酶溶液和20uL溴百里香酚蓝乙醇溶液，涡旋混匀后分别得到待测乳清液和阳性对照乳清液。例如在一种示意性实施方式中，各量取1ml待测乳和阳性对照乳，以10000rpm高速离心20min；分别取离心后的上清液，然后均加入40uL尿素酶溶液和20uL溴百里香酚蓝溶液，涡旋5s混匀，得到待测乳清液和阳性对照乳清液。

e.将待测乳清液和阳性对照乳清液静止1min，并按照如下方法定性判断待测乳清液中的尿素含量。

ea.若待测乳清的颜色比阳性对照乳清液的颜色浅，则说明待测乳中的尿素含量小于阳性对照乳中的尿素含量。例如在一种示意性实施方式中，阳性对照乳清液为蓝色，待测乳清为黄绿色，说明待测乳中的尿素含量小于阳性对照乳中0.45g/L的尿素含量。

eb. 若待测乳清的颜色比阳性对照乳清液的颜色深或颜色一致，则说明待测乳中的尿素含量大于或等于阳性对照乳中的尿素含量。

参考文献

[1][中国发明]CN201610643294.9尿素浓度检测方法及尿素浓度在线监测设备

[2] [中国发明] CN201010597413.4 一种乳中尿素定性检测方法

[3] A+医学百科