NFKB诱导激酶抗体的应用

背景^[1-3]

NFKB诱导激酶抗体是可以特异性结合NFKB诱导激酶的一类多克隆抗体，主要用于体外检测NFKB诱导激酶的免疫学实验。

细胞增殖在从发育到修复损伤组织等许多生理过程中起重要作用。多种机制参与细胞增殖的严谨调节。例如，原癌基因的活性可通过肿瘤抑制因子的作用来平衡；DNA损伤与修复的存在降低了基因突变和细胞恶性转化的风险；免疫系统可以识别并清除癌症细胞。稳态调控机制的持续性被破坏必然导致细胞增殖过度从而形成癌症。

NFKB诱导激酶免疫组化图

NFkB1和NFkB2是转录因子Rel/NFkB家族的成员，此家族还包括RelA、c-Rel和RelB。Rel/NFkB家族调控了参与免疫、凋亡和致癌过程的基因的表达。NFkB主要存在于细胞质中，并与抑制性的IkB蛋白形成复合物，当IkB磷酸化之后，NFkB被释放，并转位到细胞核。NFkB1（105 kDa）和NFkB2（100 kDa）在合成时均为前体分子，可被蛋白水解为50和52 kDa的活性亚基。

NFkB似乎在凋亡和细胞存活上有着矛盾的功能。NFkB通过抑制p53依赖的凋亡和上调Bcl-2家族的抗凋亡成员和caspase抑制剂（如XIAP和FLIP），介导了许多信号的存活反应。相反，NFkB也被DNA损伤中的凋亡刺激所激活，介导了促凋亡基因（如TRAIL R2/DR5、Fas和Fas配体）的上调。

应用^[4][5]

用于p55PIK/NFκB通路在炎症调控中的作用及机制研究

磷脂酰肌醇-3-激酶蛋白家族（PI3Ks）蛋白同免疫反应密切相关,其调节亚单位和催化亚单位的表达缺失或应用相应的PI3Ks抑制剂能够对免疫反应产生显著影响。其中,IA类PI3Ks调节亚单位能够通过其i-SH2结构域同相应的催化亚单位形成二聚体结构,进而调控催化亚单位的激酶活性。

目前关于IA类PI3Ks亚单位对免疫反应尤其是炎症反应的调控作用存在较多争议,本论文旨在明确IA类PI3Ks调节亚单位p55PIK对炎症反应的调控作用,初步探讨蛋白p55PIK对炎症反应的调控作用的机制。

方法：扩增并纯化表达蛋白p55PIK的腺病毒载体,在HaCat细胞内高表达蛋白p55PIK;通过在PMA诱导后的THP1细胞内转染蛋白p55PIK特异性的siRNA,降低蛋白p55PIK的表达。通过单独影响蛋白p55PIK的表达或者再次给予LPS（脂多糖）刺激,通过Q-PCR检测相应促炎细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6的转录水平的变化；通过ELISA试验检测相应促炎细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6的蛋白水平的变化；通过VWestern Blot检测]VFκB信号通路,PI3K/AKT通路,IKK信号通路以及MAPK信号通路的激活情况。

结果：成功扩增并纯化表达蛋白p55PIK的腺病毒载体,成功筛选出蛋白p55PIK特异性的siRNA。在HaCat细胞内单独高表达p55PIK或者再次给予LPS刺激后均能够显著促进炎症因子转录和翻译（P<0.05）,能够激活NFκB信号通路和PI3K/AKT通路,但对IKK信号通路以及MAPK信号通路无明显影响；在THP1细胞内单独低表达p55PIK或者再次给予LPS刺激后均能够显著抑制炎症因子转录和翻译（P<0.05）,能够抑制NFκB信号通路和PI3K/AKT通路的激活,但对IKK信号通路以及MAPK信号通路无明显影响。

参考文献

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[2]CD19 is essential for B cell activation by promoting B cell receptor-antigen microcluster formation in response to membrane-bound ligand.Depoil D,Fleire S,Treanor BL,et al.Nature Immunology.2008

[3]Determinant role of Phosphoinositide 3-kinase y in MCP-1-mediated amplification of PDGF-induced aortic smooth muscle cell migration.Fougerat A,Smirnova N,Gayral S,et al.British Journal of Pharmacology.2012

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[5]刘韦成.p55PIK/NFκB通路在炎症调控中的作用及机制研究[D].华中科技大学,2012.