鸡还原糖(RS)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

鸡还原糖(RS)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡还原糖（RS）水平。用纯化的鸡还原糖（RS）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入鸡还原糖（RS），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的鸡还原糖（RS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡还原糖（RS）含量。

鸡还原糖(RS)水平检测图

操作步骤

标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

应用^[4][5]

用于珍珠鸡、贵妃鸡和雉鸡肌肉营养成分和风味物质的对比研究

以三种珍禽珍珠鸡、贵妃鸡、雉鸡为研究对象,分析比较了胸肌和腿肌中三类营养成分氨基酸、脂肪酸、常见的矿质元素含量,负营养成分胆固醇的含量和四种重金属铅、镉、汞、砷的含量；并测定了三种珍禽肉风味前体物肌苷酸、游离氨基酸、总还原糖和硫胺素的含量用来比较三种珍禽风味之间的差别。

味成分分析试验采用高效液相色谱仪、紫外分光光度计等仪器分析对比了三种珍禽肉质中的风味前体物肌苷酸及其代谢产物、游离氨基酸、总还原糖和硫胺素的含量。

结果如下：1、三种珍禽胸肌中的肌苷酸（IMP）含量均显著高于腿肌中的含量（P<0.05）,同品种同部位同性别的IMP含量差异不显著（P>0.05）。雉鸡肌肉中总校正肌苷酸含量显著高于贵妃鸡和珍珠鸡（P<0.05）,胸肌中的含量为4.369mg/g,珍珠鸡和贵妃鸡肌肉中校正肌苷酸含量差异不显著（P>0.05）。

2、同种珍禽不同性别间各游离氨基酸含量差异不显著（P>0.05）。贵妃鸡中总游离氨基酸含量显著高于珍珠鸡和雉鸡（P<0.05）,珍珠鸡和雉鸡中总游离氨基酸含量差异不显著（P>0.05）。珍珠鸡、贵妃鸡、雉鸡三种珍禽胸肌中的牛磺酸、羟脯氨酸含量均差异显著（P<0.05）,珍珠鸡中牛磺酸含量最高,雉鸡中羟脯氨酸含量最高,贵妃鸡中牛磺酸和羟脯氨酸含量最低。

3、同种珍禽胸肌和腿肌中总还原糖含量差异不显著（P>0.05）；珍珠鸡、贵妃鸡、雉鸡三种珍禽肌肉中的总还原糖含量差异显著（P<0.05）,其中雉鸡最高,贵妃鸡次之,贵妃鸡含量最少。

参考文献

[1]Volatile flavor compounds produced by heat degradation of thiamine（vitamin B1）.Roy G.Arnold,Leonard M.Libbey,Robert C.Lindsay.Journal of Agriculture.1969

[2]Cholesterol function in plasma membranes from ectotherms:membrane-specific roles in adaptation to temperature.Crockett E L.American Zoologist.1998

[3]The Effects of Breed,Diet,Sex,Location and Slaughter Weight on Lamb Growth,Carcass Composition and Meat Flavor.J.D.Crouse,J.R.Busboom,R.A.Field,C.L.Ferre.Journal of Animal Sciences.1981

[4]n-3 Fatty acids and 5-y risks of death and cardiovascular disease events in patients with coronary artery disease.Erkkil Arja T,Lehto Seppo,Pyrl Kalevi,Uusitupa Matti I J.The American journal of clinical nutrition.2003

[5]刘操.珍珠鸡、贵妃鸡和雉鸡肌肉营养成分和风味物质的对比研究[D].中国农业科学院,2014.