苏木素伊红(HE)染色试剂盒的应用

背景^[1-3]

苏木素伊红(HE)染色试剂盒综合了多种经典的HE染色方法，例如Harris法、Mayer法等，简化了操作步骤，缩短了操作时间，并且染色液内不使用汞、甲醇等有毒试剂。可以用于组织切片或培养细胞的染色。

苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining)，也被称作苏木精染色，是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein)，从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+complexes)。

氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中，双链上的磷酸基团向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合，从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法，不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。

伊红(eosin)是一种化学合成的酸性染料，在水中解离成带负电荷的阴离子，可以和蛋白质氨基上带正电荷的阳离子结合，从而使细胞胞浆染成不同程度的红色或粉红色，与苏木素染色液染色形成的蓝色细胞核形成鲜明对比，从而使苏木素伊红(HE)染色成为病理组织切片中最广泛使用的一种常规染色方法。

苏木素伊红染色后细胞核呈现蓝色，细胞浆呈现粉红色或红色。

应用^[4][5]

用于瞬时受体电位M7通道在喉癌及癌旁组织表达差异的初步研究

目前TRPM7通道在人类喉恶性肿瘤的作用鲜有报道,运用分子生物学技术检测喉癌组织及癌旁正常黏膜组织TRPM7通道的表达水平,并对其表达的差异性进行研究分析；探讨TRPM7通道在喉癌的病理分型及淋巴结转移等组间的表达有无差异性,期望为喉鳞状细胞癌的临床诊断、靶向治疗及预后评估提供新颖的理论及实验室依据。

方法1、标本的收集（1）石蜡标本筛选2013年1月至2013年10月于广东省人民医院诊断为喉鳞状细胞癌患者的石蜡组织标本,符合要求者共计18例。组织10%中性甲醛固定后,由我院病理科石蜡包埋,行苏木素-伊红染色病理确诊。

（2）冰冻标本收集2013年11月至2014年2月于我院诊断为原发性喉鳞状细胞癌的患者13例,标本离体后收集癌组织及癌周正常组织,保存于无Rnase离心管中,液氮运输,-80-C超低温冰箱冻存。癌旁正常组织标本经HE染色证实未见癌细胞浸润。

（3）入组患者均符合以下要求：①患者均为原发性喉癌,且全身无转移及未曾罹患其他恶性肿瘤,术后病理玻片经HE染色示鳞状细胞癌,癌旁正常黏膜组织可见排列整齐的复层鳞状细胞；②所有患者术前均未接受放射治疗或化学治疗；③患者入院均行开放性手术治疗；④癌组织标本行苏木素-伊红染色（HE染色）提示鳞状细胞癌,癌旁组织均可见正常鳞状上皮细胞。排除标准：既往有癌症史的患者或曾接受放疗、化疗或行同位素治疗的患者均不纳入研究范围。

2、免疫组织化学染色石蜡切片经S-P免疫组化法染色后,光学显微镜下观察显色结果。采用Bresalier半定量公式判断染色结果,对染色结果进行半定量分析：将免疫染色玻片在10倍物镜视野下观察,随机选取5个视野,并记录其染色强度,根据染色强度分为四级,并分别计分：细胞无着色,阴性（0分）；细胞染色为浅黄色,弱阳性（1分）；细胞着色为棕黄色,阳性（2分）；细胞着色为棕褐色,强阳性（3分）,计算每一强度的视野数,根据公式：染色强度=∑｛（0xF0）+（1×F1）+（2×F2）+（3xFi）),Fi=%10×视野数（i=0,1,2,3）计算每张玻片的染色强度。

参考文献

[1]Trends in incidence and prognosis for head and neck cancer in the United States:a site-specific analysis of the SEER database.Carvalho AndréLopes,Nishimoto Inês Nobuko,Califano Joseph A,Kowalski Luiz Paulo.International journal of cancer.Journal international du cancer.2004

[2]HER-2 amplification impedes the antiproliferative effects of hormone therapy in estrogen receptor-positive primary breast cancer.Dowsett M,Harper-Wynne C,Boeddinghaus I,Salter J,Hills M,Dixon M,Ebbs S,Gui G,Sacks N,Smith I.Cancer Research.2001

[3]TRPM7 channel regulates PDGF-BB-induced proliferation of hepatic stellate cells via PI3K and ERK pathways.Fang L,Zhan S,Huang C,et al.Toxicology and Applied Pharmacology.2013

[4]TRPM channels in the vasculature.Zholos Alexander,Johnson Christopher,Burdyga Theodor,Melanaphy Donal.Advances in experimental medicine and biology.2011

[5]任晓彤.瞬时受体电位M7通道在喉癌及癌旁组织表达差异的初步研究[D].南方医科大学,2014.