胰酶细胞消化液(含酚红)的应用

背景^[1-3]

胰酶细胞消化液(含酚红)0.25%胰酶、0.02%EDTA和酚红，pH值为7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌，可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。

贴壁细胞的消化：

1、吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。

2、加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。

3、显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化，或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来；此时吸除胰酶细胞消化液；加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。

4、如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。

5、如果发现细胞消化时间过长，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

组织的消化：不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

注意事项：

1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。

2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。

应用^[4][5]

用于比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒的2BS消化效果分析研究

比较胰酶和EDTA两种消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞冻融后的病毒滴度（VT）。方法分别配制两种浓度的胰酶和EDTA:0.125%、0.25%的胰酶,0.01%、0.02%的EDTA各1000ml,按比例加入预先培养好的携带水痘-带疱疹病毒的等量2BS细胞中,消化后,用显微镜观察细胞形态,消化液离心、浓缩、冻融、检测并比较病毒滴度。

结果与0.125%、0.25%的胰酶、0.01%EDTA,0.25%的胰酶与0.02%的EDTA混合消化液相比,用0.02%的EDTA消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞,冻融后的病毒滴度提高了1.3～0.8个log值。结论用0.2%EDTA消化液消化的含有水痘病毒的细胞获得的病毒滴度。

参考文献

[1]Establishment and Maintenance of Human Embryonic Stem Cell Lines on Human Feeder Cells Derived from Uterine Endometrium under Serum-Free Condition1[J].Jung Bok Lee,Jeoung Eun Lee,Jong Hyuk Park,Sun Jong Kim,Moon Kyoo Kim,Sung Il Roh,Hyun Soo Yoon.Biology of Reproduction.2005(1)

[2]Wnt signalling inhibits neural differentiation of embryonic stem cells by controlling bone morphogenetic protein expression[J].Lorenz Haegele,Barbara Ingold,Heike Naumann,Ghazaleh Tabatabai,Birgit Ledermann,Sebastian Brandner.Molecular and Cellular Neuroscience.2003(3)

[3]Id proteins in development,cell cycle and cancer[J].Marianna B.Ruzinova,Robert Benezra.Trends in Cell Biology.2003(8)

[4]BMP Induction of Id Proteins Suppresses Differentiation and Sustains Embryonic Stem Cell Self-Renewal in Collaboration with STAT3[J].Qi-Long Ying,Jennifer Nichols,Ian Chambers,Austin Smith.Cell.2003(3)

[5]郝鹏博,谢秋红,杜岩,杨蕾蕾.比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒的2BS消化效果分析[J].中国实用医药,2011,6(21):60-61.