对苯二甲酸二乙酯的降解方法

发布日期:2020/11/24 14:13:14

背景及概述^[1]

对苯二甲酸二乙酯(DTP)是一种含苯环类物质，含苯环类物质在化学工业中具有广泛的应用，因此形成的工业废弃物数量较多，且苯环类物质对环境有一定毒害作用，对生物甚至有致癌致畸作用，因此，苯环类物质的降解是研究的热门课题。

降解方法^[1]

采用单一睾丸酮丛毛单胞菌针对对苯二甲酸二乙酯进行降解，主要包括以下步骤：

(1).菌种的培养：将睾丸酮丛毛单胞菌菌种在30‑37℃、斜面固体培养基中培养12‑18h，存于4℃冰箱中备用；所述固体培养基的成分是：磷酸二氢钾 3g/L，磷酸氢二钠7g/L，氯化铵1g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁0.25g/L，琼脂粉 18g/L和底物3g/L；所述底物为对苯二甲酸二乙酯；

(2).底物溶液的配制：按照液体培养基的成分，配制浓度为1‑5g/L的底物溶液5‑9份，每份50ml，分别装在150ml锥形瓶中，121℃下包扎灭菌25min 后，冷却后备用；所述液体培养基的成分是：磷酸二氢钾3g/L，磷酸氢二钠7g/L，氯化铵1g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁0.25g/L和底物用量为1‑5g/L；

(3).底物的降解：将(1)中的睾丸酮丛毛单胞菌菌种转接到(2)中的底物溶液中，制得降解液，并于30‑37℃、振荡培养器转速为200r/min的条件下，振荡培养、催化降解底物对苯二甲酸二乙酯；

(4).底物降解率的检测：从未反应的零时开始计时，每隔12h，取出一瓶降解液，95℃水浴灭活5min，冷却后加入10ml正己烷，充分振荡，萃取未溶解的底物，静置脱泡后，取正己烷层中的液体用正己烷稀释50‑250倍，采用紫外分光光度计进行400‑190nm波长的扫描，根据240nm处吸收峰的高低，判断底物含量变化；

(5).底物降解产物的检测：从未反应的零时开始计时，每隔12h，取出一瓶降解液，95℃水浴灭活5min，冷却后加入10ml正己烷，充分振荡，萃取未溶解的底物，静置脱泡后，取水层中的液体用蒸馏水稀释50‑250倍，采用紫外分光光度计进行400‑190nm波长的扫描，根据240nm处吸收峰的高低，判断降解中间产物对苯二甲酸含量的变化；

当(4)中的正己烷层与(5)中的水层均无吸收峰时，认为底物降解完全，且中间产物对苯二甲酸降解完全，底物降解彻底。