ISHIKAWA细胞的应用

背景^[1-3]

ISHIKAWA细胞是分离自人子宫内膜癌细胞的贴壁上皮样细胞系，是分化良好的子宫内膜腺癌细胞。

子宫内膜癌是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，好发于围绝经期和绝经后女性。子宫内膜癌是最常见的女性生殖系统肿瘤之一，每年有接近20万的新发病例，并是导致死亡的第三位常见妇科恶性肿瘤（仅次于卵巢癌和宫颈癌）。

细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）ECC-1子宫内膜癌细胞株传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

应用^[4][5]

用于PP2A对子宫内膜癌Ishikawa细胞的生物学功能影响研究

探讨蛋白磷酸酶2A（PP2A）特异性抑制剂冈田酸（OA）及激动剂D-赤型神经胺（DES）作用于人子宫内膜癌细胞系（Ishikawa细胞）,其对细胞水平PP2A表达情况及细胞功能的影响。

方法:1.常规培养Ishikawa细胞,取对数生长期的细胞,使用PP2A激动剂（DES浓度分别为0nmol/l,5nmol/l,10nmol/l,20nmol/l）及PP2A抑制剂（OA浓度分别为0nmol/l,10nmol/l,20nmol/l,40nmol/l）分别处理12h、24h,48h后,加入CCK8溶液检测OA及DES对细胞的增殖及抑制情况;

2. 进一步选取其中对Ishikawa细胞增殖率和抑制率最明显的浓度和时间点作为实验组,并设置对照组,其中选择DES的浓度为20nmol/l,选择OA的浓度为40nmol/l,于48h行划痕试验检测细胞的迁移能力,Treanswell试验检测细胞的侵袭能力,流式细胞学测细胞周期,Western Blot法检测细胞水平PP2A的表达变化情况。

结果:1.DES总体上显示出了对Ishikswa细胞的抑制作用;行两两比较,发现随着浓度和时间的增加,其抑制率显示出了时间-剂量依赖性;其中以DES浓度为20nM、时间为48h时,其抑制作用最明显。OA总体上显示出了对Ishikswa细胞的促增殖作用,行两两比较,随着时间和浓度的增加,其增殖率显示出了时间-剂量依赖性;其中以OA浓度为40nM、时间为48h时,其增殖作用最明显。

2.浓度为40nmol/l的OA及20nmol/l的DES作用于Ishikawa细胞48h时,划痕试验显示:与对照组相比,OA能明显促进细胞迁移,DES能明显抑制细胞的迁移,差异均有统计学意义。Treanswell试验显示:与对照组相比,OA为能明显促进细胞侵袭,DES能明显抑制细胞的侵袭,差异均有统计学意义。

参考文献

[1]The red wine component ellagic acid induces autophagy and exhibits anti‐lung cancer activity in vitro and in vivo[J].Jing Duan,Ji‐Cheng Zhan,Gui‐Zhen Wang,Xin‐Chun Zhao,Wei‐Dong Huang,Guang‐Biao Zhou.Journal of Cellular and Molecular Medicine.2019(1)

[2]Targeted therapies don’t work for a reason;the neglected tumor suppressor phosphatase PP 2A strikes back[J].Jukka Westermarck.The FEBS Journal.2018(22)

[3]Global cancer statistics 2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J].Freddie Bray BSc,MSc,PhD,Jacques Ferlay ME,Isabelle Soerjomataram MD,MSc,PhD,Rebecca L.Siegel MPH,Lindsey A.Torre MSPH,Ahmedin Jemal PhD,DVM.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2018(6)

[4]Impact of lower uterine segment involvement in type II endometrial cancer and the unique mutational profile of serous tumors[J].Liron Kogan,David Octeau,Zainab Amajoud,Jeremie Abitbol,Ido Laskov,Alex Ferenczy,Manuela Pelmus,Neta Eisenberg,Roy Kessous,Susie Lau,Amber Yasmeen,Walter H.Gotlieb,Shannon Salvador.Gynecologic Oncology Reports.2018

[5]周昌.PP2A对子宫内膜癌Ishikawa细胞的生物学功能影响[D].湖南师范大学,2020.