0.5%葡萄糖肉汤培养基的应用

背景^[1-3]

0.5%葡萄糖肉汤培养基用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查，还用于消毒效果生物监测评价中指示菌的培养。成分：蛋白胨、牛肉浸粉提供氮源、碳源、维生素和生长因子；葡萄糖是可发酵糖类；氯化钠维持均衡的渗透压。

用法：称取本品23.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，备用。

硫酸链霉素为一种氨基糖苷类抗生素药品。硫酸链霉素对结核杆菌具有强大的抗菌作用，对多数革兰阳性球菌(如各种链球菌)和杆菌(如铜绿假单胞菌、厌氧菌)的抗菌作用不强，对许多革兰阴性杆菌有较强的抗菌作用，对各种皮肤结核病皆有效，有抑制结核杆菌繁殖及毒素产生的作用，高浓度时(>0.4μg/mL)有杀菌作用。结核杆菌对链霉素的耐药性产生迅速，宜与其他抗结核药联合应用。

链霉素对结核分枝杆菌有强大抗菌作用，其最低抑菌浓度一般为0.5mg/ml。非结核分枝杆菌对该品大多耐药。链霉素对许多革兰阴性杆菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、肠杆菌属、沙门菌属、志贺菌属、布鲁菌属、巴斯德杆菌属等也具抗菌作用；脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌亦对该品敏感。链霉素对葡萄球菌属及其他革兰阳性球菌的作用差。各组链球菌、铜绿假单胞菌和厌氧菌对该品耐药。

应用^[4][5]

用于大肠杆菌-类中性粒细胞-金属片共培养模型的构建研究

建立稳定发光的类中性粒细胞-大肠杆菌-金属片双荧光三相共培养动态模型,并研究其可行性和应用价值。方法抽提pUC57-mCherry质粒,电转入大肠杆菌临床株ST131,构建稳定发光的ST131-mCherry大肠杆菌。通过活体成像(IVIS)系统对构建的ST131-mCherry大肠杆菌进行筛选。

通过稀释涂板法比较ST131-mCherry与ST131的生长曲线,通过结晶紫染色比较ST131-mCherry与ST131的生物膜形成能力。将ST131-mCherry与钛片共培养,荧光显像观察不同时间点成膜情况,并通过超声震荡稀释涂板法对钛片表面生物膜计量。

采用全反式维甲酸(ARTA)诱导HL60-eGFP细胞分化为类中性粒细胞。使用诱导分化的HL60-eGFP细胞、ST131-mCherry与金属片共培养,构建双荧光三相共培养模型,通过荧光显微镜观察以及稀释涂板计数评价不同金属表面的类中性白细胞抗菌能力。使用独立样本t检验对OD值和活菌数等定量数据进行统计。结果经临床株筛选,质粒电转获得红色荧光菌株"ST131-mCherry",在体外连续培养48 h,ST131-mCherry可稳定发光。ST131-mCherry与野生株ST131相比,两者的生长曲线没有统计学差异。

在胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)中,ST131与ST131-mCherry生物膜结晶紫染色490nm的OD值分别为(1.04±0.06)和(1.04±0.05)(t=0.890,P>0.05);在0.5%葡萄糖胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSBG)中,分别为(1.55±0.06)和(1.49±0.17)(t=0.822,P>0.05);在10%滑液(SF)中,分别为(2.13±0.16)和(2.124±0.13)(t=0.833,P>0.05)。

ST131-mCherry可以在钛片表面成膜,其荧光强度随着成膜量的增加而变强。诱导分化的HL60-eGFP细胞、ST131-mCherry与钛片或钽片共培养结果显示,经过60 min的共培养,钽金属体系内的HL60-eGFP细胞能够吞噬更多的ST131-mCherry大肠杆菌,钛片体系和钽片体系内细菌存活率分别为(33±2.5)%和(15.7±1.2)%(t=10.47,P<0.01)。

参考文献

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[4]A novel thermal decomposition approach to synthesize hydroxyapatite–silver nanocomposites and their antibacterial action against GFP-expressing antibiotic resistant E.coli[J].Geetika Sahni,P.Gopinath,P.Jeevanandam.Colloids and Surfaces B:Biointerfaces.2013

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