醛固酮类还原酶家族7成员A2抗体的应用

背景^[1-3]

醛固酮类还原酶家族7成员A2抗体是一类可以特异性结合醛固酮类还原酶家族7成员A2的多克隆抗体，主要用于检测醛固酮类还原酶家族7成员A2的相关免疫学实验。

人醛固酮类还原酶家族7成员A2重组蛋白是在大肠杆菌中重组表达的，是一条单链、非糖基化的多肽链，包含有398个氨基酸(1-359 a.a.)，分子量为44kDa。该人醛固酮类还原酶家族7成员A2重组蛋白的N末端融合了一个39个氨基酸的His标签，该蛋白最终由标准的色谱技术纯化出。

醛酮还原酶7（AKR7）家族包括AKR7A2，AKR7A3和AKR7A4在人类，AKR7A5在小鼠和AKR7A2大鼠，所有这些功能中的黄曲霉毒素B（1）和其它含二羰基化合物的代谢。更具体地，AKR7A蛋白参与与相邻碳原子上的酮基的化合物的代谢中的广泛范围的组织中，特别是肝脏。人AKR7A2基因映射到人类染色体1p35-36，频繁删除散发性大肠癌的区域。这种相关性的功能意义在于AKR7A2在人类肝脏中组成性表达，以消除黄曲霉毒素（一种环境致癌物），从而作为一种内源性化学-预防剂。

黄曲霉毒素（AFT）是黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素。其衍生物有约20种，分别命名为B1、B2、G1、G2、M1、M2、GM、P1、Q1、毒醇等。其中以B1的毒性，致癌性最强。动物食用黄曲霉毒素污染的饲料后，在肝、肾、肌肉、血、奶及蛋中可测出极微量的毒素。黄曲霉毒素及其产生菌在自然界中分布广泛，有些菌株产生不止一种类型的黄曲霉毒素，在黄曲霉中也有不产生任何类型黄曲霉毒素的菌株。黄曲霉毒素主要污染粮油及其制品，各种植物性与动物性食品也能被污染。

应用^[4][5]

用于醛酮还原酶AKR7A3在肝细胞中的表达及性质研究

AKR7A3属醛酮还原酶(AKR),是NADPH依赖型的氧化还原酶超家族当中的一种。AKR7A3在体内参与了很多极为重要的体内生理活动,比如说激素合成、药物排出体外、炎症反应以及解毒过程中有着不可忽视的作用。AKR7A3在肝、肾和子宫等器官发生癌变的过程中表达量有变化。作为黄曲霉毒素解毒酶被人们广泛所了解。文献表明AKR7A3和肝癌的发生发展有着一定关联性。

以AKR7A3做研究对象,构建AKR7A3-pET-15b表达载体,使用大肠杆菌BL21原核表达醛酮还原酶AKR7A3,对表达条件进行相应优化,并测定原核表达蛋白的有关活性。建立AKR7A3小鼠多抗体模型,获得多克隆抗体。选用肝细胞HL-7702和肝癌细胞HepG2细胞株,利用ELISA、RT-PCR等技术,在细胞中从蛋白质以及核酸分子表达水平上,探索该酶和肝癌之间的关系。

实验结果表明:原核表达出了大量高纯度的有生物活性的人源AKR7A3蛋白,并优化条件,结果为温度16℃、转速110 rpm/h、时间20 h,IPTG浓度1.00 mM/L。免疫的活体动物得到了相应的AKR7A3多克隆抗体。该种酶在两种细胞中表达的测定结果为:蛋白质水平上肝细胞是肝癌细胞的2.1倍;核酸水平上肝细胞是肝癌细胞的2.84倍。

参考文献

[1]The aldo-keto reductases(AKRs):Overview[J].Trevor M.Penning.Chemico-Biological Interactions.2015

[2]Down-regulation of aldo–keto reductase AKR1B10 gene expression by a phorbol ester via the ERK/c-Jun signaling pathway[J].Toru Nishinaka,Takeshi Miura,Mihoko Sakou,Chiemi Hidaka,Chisato Sasaoka,Asuka Okamura,Atsushi Okamoto,Tomoyuki Terada.Chemico-Biological Interactions.2015

[3]The DHEA-sulfate depot following P450c17 inhibition supports the case for AKR1C3 inhibition in high risk localized and advanced castration resistant prostate cancer[J].Daniel Tamae,Elahe Mostaghel,Bruce Montgomery,Peter S.Nelson,Steven P.Balk,Philip W.Kantoff,Mary-Ellen Taplin,Trevor M.Penning.Chemico-Biological Interactions.2015

[4]Overexpression of aldo-keto reductase 1C3(AKR1C3)in LNCaP cells diverts androgen metabolism towards testosterone resulting in resistance to the 5α-reductase inhibitor finasteride[J].Michael C.Byrns,Rebekka Mindnich,Ling Duan,Trevor M.Penning.Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology.2011(1-2)

[5]周紫薇.醛酮还原酶AKR7A3在肝细胞中的表达及性质研究[D].长春理工大学,2018.