兔抗绵羊IGG(H&L)二抗,HRP标记的应用

背景^[1-3]

兔抗绵羊IGG(H&L)二抗,HRP标记是以绵羊IGG(H&L)为抗原以兔为免疫宿主的HRP标记免疫蛋白，可以特异性结合绵羊IGG(H&L)，主要用于检测马IGG的Western blotting、ELISA等生物实验。第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。二抗用于靶抗原的间接检测。二抗可通过信号放大提高灵敏度，并为标记和检测提供了更大灵活性。

抗体就是平常所说的抗体，即能和抗原特异性结合。第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。主要用于检测抗体的存在。一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。也就是说，抗原进入机体刺激机体免疫系统产生免疫应答，由B细胞可以产生与相应抗原发生特异性结合的特殊蛋白质。一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团（底物和二抗）。

一抗：可以特异结合底物，就是识别出我们想要检测的东西。一抗和底物结合与否用肉眼是看不出来的。二抗：可以和一抗结合，并带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是检测一抗。如果一抗自己带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），则不需要二抗。但这样成本很高，因为一种一抗只识别一种底物。所以如今的设计一般是二抗带上可检测标记，再来检测一抗。而一抗识别底物。这样，当一抗结合到底物上，就可以通过二抗检测出来。

应用^[4][5]

用于绵羊IgG2 Fc受体（Fcγ2R）基因克隆与表达研究

Fc受体(FcR)为特异亲和免疫球蛋白(Ig)Fc片段的细胞表面分子,广泛表达于免疫辅助细胞和效应细胞,具有许多重要的生理功能,是体液免疫与细胞免疫的联系纽带,在机体免疫调节中起关键作用。目前仅人和小鼠的三类IgG Fc受体(FcγRⅠ、FcγRⅡ和FcγⅢ)研究的较为深入。牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)是一类新型的FcγR,与人IgA Fc受体(huFcαRI)同源,胞外区含有2个Ig样结构域,通过远膜端结构域(ECl)与牛IgG2特异结合。

利用生物信息学和分子生物学技术,首次克隆了绵羊IgG2 Fc受体cDNA。即用boFcγ2R氨基酸序列检索NCBI的EST数据库(tBLASTn),发现了多个高同源序列。再采用cDNA快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)从绵羊外周血白细胞cDNA中分别扩增到了3’端以及编码区cDNA,通过序列拼接得到全长cDNA序列。

获得了绵羊IgG2 Fc受体(Fcγ2R)基因,命名为ovFcγ2R。ovFcγ2R全长1526 bp,包括126bp短的5’端非翻译区和620bp长的3’端非翻译区,ORF(open reading frame)全长780bp,编码259氨基酸的糖蛋白。前18个氨基酸为预测的N端信号肽序列,胞外区四个半胱氨酸残基形成Ig样结构的两个二硫键,19个氨基酸组成的疏水跨膜区和15个氨基酸的胞内区。

胞外区有3个N-糖基化位点。同时为深入研究ovFcγ2R受体的结构与功能,将ovFcγ2R胞外区cDNA亚克隆到原核表达载体pET-28a,并转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了ovFcγ2R胞外区,SDS-PAGE和Western证明重组蛋白以包涵体的形式高效表达。

参考文献

[1]FcγReceptors:Old Friends and New Family Members[J].Falk Nimmerjahn,Jeffrey V.Ravetch.Immunity.2006(1)

[2]Decreased transcription of the human FCGR2B gene mediated by the-343 G/C promoter polymorphism and association with systemic lupus erythematosus[J].Marissa C.Blank,Radu N.Stefanescu,Emi Masuda,Francesc Marti,Philip D.King,Patricia B.Redecha,Robert J.Wurzburger,Margaret G.E.Peterson,Shizuko Tanaka,Luminita Pricop.Human Genetics.2005(2-3)

[3]A Newly Discovered Fc Receptor that Explains IgG-Isotype Disparities in Effector Responses[J].Silvia Bolland.Immunity.2005(1)

[4]FcγRIV:A Novel FcR with Distinct IgG Subclass Specificity[J].Falk Nimmerjahn,Pierre Bruhns,Ken Horiuchi,Jeffrey V.Ravetch.Immunity.2005(1)

[5]段艳华.绵羊IgG2 Fc受体（Fcγ2R）基因克隆与表达[D].河南农业大学,2007.