ANTI-BETA-ACTIN抗体的应用

背景^[1-3]

ANTI-BETA-ACTIN抗体是ANTI-BETA-ACTIN为抗原制得的免疫抗体，可以特异性结合BETA-ACTIN。主要用于检测BETA-ACTIN的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

β-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。β-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织或细胞内，β-Actin的表达量就很少。

β-Actin内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。首先，我们需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于β-Actin的检测分子量大约在42kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测38kD-48kD大小目标蛋白的WB实验中。另外，虽然β-Actin是最合适的内参抗体之一，但是在某些条件下，一些因素也会导致样品间β-Actin含量的变化。特别需要注意的是，在脂肪组织里，β-Actin的表达量非常低，不适合作为内参。

应用^[4][5]

用于大鼠GAPDH、β-actin mRNA降解与死亡时间推断的相关性研究

应用一步法荧光标记逆转录-聚合酶联反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测了大鼠死后不同时间间隔脑、肝、脾、肾管家基因磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde phosphate dehydrogenase,GAPDH)及β-肌动蛋白(β-actin)mRNA的降解情况,旨在为PMI推断提供一种新的指标。

通过系统观察大鼠死后不同时间脑、肝、脾、肾管家基因GAPDH及β-actin mRNA的降解规律,确定大鼠死后不同组织GAPDH及β-actin mRNA的检测时限,探讨其在PMI推断上的法医学应用价值,为PMI推断的研究提供一种新的、可靠的检测指标。方法:Wistar大鼠56只,雌雄不限,体重200～250g,断颈处死后置于20℃温度控制系统内。

分别于死后0h、8h、16h、24h、32h、40h、48h、72h、4d、5d、6d、7d、8d、9d解剖(n=4),按照RNA抽提的方法,分别提取大鼠脑、肝、脾、肾的总RNA,利用ABI 9700型PCR基因扩增仪,通过一步法复合荧光RT-PCR技术扩增,各时间点扩增产物分别在ABI 3100型DNA遗传分析仪上进行电泳分离,并应用其自带的分析软件(GeneScan Analysis Version 3.1),通过与Genescan-500TM ROX(marker)标准分子量作比对,确定脑、肝、脾、肾管家基因GAPDH及β-actin mRNA转化的PCR产物,记录并分析每个特异性峰的峰面积(Peak Area),各时间点与死后即时(0h)的峰面积之比值作为该点mRNA的相对含量。以未加RT/Platinum?Taq混合酶的作为实验阴性对照组。

结果:大鼠死后7d脑组织、48h肝组织、32h脾组织、40h肾组织内均可检测到GAPDH mRNA,8d脑组织、72h肝组织、40h脾组织、48h肾组织内均可检测到β-actin mRNA,且其量均呈规律性下降趋势(电泳峰面积逐渐变小、谱带亮度逐渐变暗并最终消失),其扩增产物的降解过程呈现出一定的规律性。

参考文献

[1]Is there recent progress in the estimation of the postmortem interval by means of thanatochemistry?[J].Burkhard Madea.Forensic Science International.2005(2)

[2]Artificial Neural Network and Tissue Genotyping of Hepatocellular Carcinoma in Liver-Transplant Recipients:Prediction of Recurrence[J].Hector Rodriguez-Luna,Hugo E.Vargas,Thomas Byrne,Jorge Rakela.Transplantation.2005(12)

[3]Artificial neural networks in urolithiasis[J].Prabhakar Rajan,David A Tolley.Current Opinion in Urology.2005(2)

[4]Estimation of the time since death in the early post-mortem period[J].Forensic Science International.2004(2)

[5]朱方成.大鼠GAPDH、β-actin mRNA降解与死亡时间推断的相关性研究[D].华中科技大学,2006.