BETA ACTIN抗体的应用

背景^[1-3]

BETA ACTIN抗体是一类可以特异性结合BETA ACTIN的单克隆抗体，主要用于检测BETA ACTIN的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

Actin即肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin和γ-non-muscle actin。β-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织或细胞β-Actin抗体推荐—高效价的内参抗体内，β-Actin的表达量就很少。

β-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。β-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织或细胞内，β-Actin的表达量就很少。

β-Actin内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。首先，我们需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于β-Actin的检测分子量大约在42kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测38kD-48kD大小目标蛋白的WB实验中。另外，虽然β-Actin是最合适的内参抗体之一，但是在某些条件下，一些因素也会导致样品间β-Actin含量的变化。特别需要注意的是，在脂肪组织里，β-Actin的表达量非常低，不适合作为内参。

应用^[4][5]

用于虾夷扇贝beta-actin基因和G型溶菌酶基因的克隆与表达研究

利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了健康虾夷扇贝外套膜和肾脏两种组织的cDNA文库。对随机选取的4009个克隆进行5’端测序,比对,从虾夷扇贝肾脏文库中筛选出1条β肌动蛋白同源序列,对此EST序列两端进行扩增、测序,得到肌动蛋白基因cDNA全长序列。该cDNA全长为1536bp,5’端非编码区84 bp,3’端非编码区321 bp,编码区1131 bp,编码377个氨基酸;在基因组DNA中,该基因被一个内含子分为两段,内含子位于第41和第42个氨基酸之间,长度为1498bp。

虾夷扇贝β-肌动蛋白基因可以被用于作为定量某种虾夷扇贝mRNA的标准,这为继续研究虾夷扇贝其他功能基因,及其分子生物的进一步研究、促进其他相关分子发育和系统进化研究奠定了基础。从虾夷扇贝外套膜文库中筛选出G型溶菌酶同源序列,对此EST序列两端进行扩增、测序,得到G型溶菌酶基因cDNA全长序列。该基因序列全长为731 bp,5’端非编码区25 bp,3’端非编码区100 bp,编码区606 bp,编码202个氨基酸。

经过进一步分段扩增、测序,得到该基因的五个内含子,将该基因分成六个外显子。六个外显子长度分别为55 bp,60 bp,90 bp,113 bp,148 bp和140 bp;五个内含子的长度分别为7087 bp,5178 bp,3526 bp,710 bp和1400 bp;内含子的两侧都具有RNA正确剪接所必需的识别位点(GT/AG)。采用实时定量PCR方法,检测了虾夷扇贝G型溶菌酶基因在不同组织中的表达以及在菌注射后不同时段G型溶菌酶基因在血细胞中的表达状况。

参考文献

[1]Transformation and expression of Paralichthys olivaceus growth hormone cDNA in Synechocystis sp.PCC6803[J].Xiao-Nan Zang,Bin Liu,Shun-Mei Liu,Ping-Nan Sun,Xiao-Qing Zhang,Xue-Cheng Zhang.Aquaculture.2007(1)

[2]The cDNA cloning and mRNA expression of a potential selenium-binding protein gene in the scallop Chlamys farreri[J].Linsheng Song,Huibin Zou,Yaqing Chang,Wei Xu,Longtao Wu.Developmental and Comparative Immunology.2005(3)

[3]Cloning and Sequencing of the Growth Hormone Gene of Large Yellow Croaker and Its Phylogenetic Significance[J].Yun Chen,Yaping Wang,Shunping He,Zuoyan Zhu.Biochemical Genetics.2004(9-10)

[4]Characterization of a new C-type lectin from common carp Cyprinus carpio[J].Ram Savan,Makoto Endo,Masahiro Sakai.Molecular Immunology.2004(9)

[5]傅立元.虾夷扇贝beta-actin基因和G型溶菌酶基因的克隆与表达研究[D].辽宁师范大学,2010.