anti-Lamin B1 抗体的应用

背景^[1-3]

anti-Lamin B1是以anti-Lamin B为抗原的免疫蛋白，可以特异性结合anti-Lamin B，主要用于检测anti-Lamin B的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物实验。

Lamin B1是一种蛋白质,在人类由LMNB1基因编码，核纤层由位于内核膜旁边的蛋白质的二维基质组成,层系蛋白家族构成基质并在进化过程中高度保守的。在有丝分裂过程中,板矩阵是可逆拆卸核纤层蛋白蛋白质磷酸化。核纤层蛋白的蛋白质被认为是参与核稳定、染色质结构和基因表达。脊椎动物核纤层蛋白包括两种类型,A和B,这个基因编码的两个B型蛋白质B1。核纤层蛋白B和异染色质,固定在核膜的内表面的核纤层蛋白B受体。

核纤层蛋白是核纤层的结构部件，用于支撑核被膜并参与细胞周期中核被膜的解体和再形成。在动物细胞中，3种基因编码了至少7种核纤层蛋白。LMNA基因通过可变剪接编码A型和C型核纤层蛋白，而LMNB1和LMNB2分别编码核纤层蛋白B1和B2。B型核纤层蛋白存在于每个细胞。A型核纤层蛋白在原肠胚形成后表达，C型核纤层蛋白的表达是组织特异性的。在核纤层蛋白中，核纤层蛋白B1往往被用作内参。核纤层蛋白B1在物种间是高度保守的。分子量为66Kd，适合补充使用。

应用^[4][5]

用于Cav1.3钙离子通道蛋白和LaminB1核纤层蛋白在大鼠耳蜗发育阶段的表达及作用研究

新生SD大鼠耳蜗血管纹边缘细胞原代培养及Cav1.3、LaminB1蛋白的表达目的:建立新生大鼠耳蜗血管纹边缘细胞(MCs)体外培养体系,探讨Cav1.3钙离子通道蛋白、LaminB1核纤层蛋白在原代培养的新生大鼠边缘细胞中是否表达。方法:选用新生Sprague Dawley乳鼠(p0-p3)为实验对象,断头处理后在解剖显微镜下分离外侧壁,眼科剪剪切成微小的组织块,利用酶消化法将细胞悬液接种在六孔板上。利用含2%胎牛血清的动物上皮培养基培养,隔天换液。吹打纯化后制成细胞爬片,采用免疫荧光法检测上皮细胞特异性角蛋白CK-18、Cav1.3钙离子通道蛋白、LaminB1核纤层蛋白的表达。

结果:倒置光学显微镜下,24小时内可见大部分接种的细胞团块贴壁良好。培养第4-5天时,多角形的边缘细胞和梭形的成纤维细胞混合生长。MCs呈多角形,大小不一,颜色较暗,界限清楚,细胞之间连接紧密,形成典型的铺路石样外观。7-9天时,数百个多角形的边缘细胞以及周围的液体区域形成“dome”结构。14天后,多角形细胞体积变大,胞质内颗粒样物质增多,出现多核或者大核,细胞骨架明显,直至崩解。

免疫细胞化学法检测细胞角蛋白CK-18、Cav1.3钙离子通道蛋白、LaminB1核纤层蛋白表达阳性。结论:成功建立了新生大鼠血管纹边缘细胞体外培养体系,为研究边缘细胞的生理功能奠定了技术基础。经过免疫细胞化学实验首次证实了新生大鼠的边缘细胞具有表达Cav1.3钙离子通道蛋白、LaminB1核纤层蛋白的能力,初步揭示了Cav1.3、LaminB1在耳蜗发育中扮演一定的角色,为后续实验奠定了理论基础。

参考文献

[1]Calcium signaling in health,disease and therapy[J].Jan B.Parys,Geert Bultynck.BBA-Molecular Cell Research.2018

[2]Cochlear hair cell regeneration:an emerging opportunity to cure noise-induced sensorineural hearing loss[J].Ibrahima Youm,Wei Li.Drug Discovery Today.2018

[3]Targeted Apoptosis of Senescent Cells Restores Tissue Homeostasis in Response to Chemotoxicity and Aging[J].Marjolein P.Baar,Renata M.C.Brandt,Diana A.Putavet,Julian D.D.Klein,Kasper W.J.Derks,Benjamin R.M.Bourgeois,Sarah Stryeck,Yvonne Rijksen,Hester van Willigenburg,Danny A.Feijtel,Ingrid van der Pluijm,Jeroen Essers,Wiggert A.van Cappellen,Wilfred F.van IJcken,Adriaan B.Houtsmuller,Joris Pothof,Ron W.F.de Bruin,Tobias Madl,Jan H.J.Hoeijmakers,Judith Campisi,Peter L.J.de Keizer.Cell.2017(1)

[4]Lamin-B1 contributes to the proper timing of epicardial cell migration and function during embryonic heart development[J].Joseph R.Tran,Xiaobin Zheng,Yixian Zheng.Molecular Biology of the Cell.2016(25)

[5]杜智会.Cav1.3钙离子通道蛋白和LaminB1核纤层蛋白在大鼠耳蜗发育阶段的表达及作用[D].华中科技大学,2019.