ANTI-RAT BOK的应用

背景^[1-3]

ANTI-RAT BOK是以ANTI-RAT BOK为抗原的免疫蛋白，可以特异性结合RAT BOK，主要用于检测RAT BOK的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物实验。bok(Bcl-2-related ovarian killer)是Bcl-2家族成员中的促凋亡成员，Bcl-2基因（即B细胞淋巴瘤/白血病-2基因）是一种癌基因，它具有明显抑制细胞凋亡的作用，并且近年来的一些研究已开始揭示这一作用的机制。自从1972年Kerr提出细胞凋亡（apoptosis）的概念至今，人们对细胞凋亡现象进行了广泛、深入的研究。但是，凋亡的分子和生化机制迄今尚未彻底明了，而已形成的初步认识大多源于对Bcl-2基因家族的研究。

已知，凋亡进程可分为三个时相：诱导期，效应期和降解期。在诱导期，细胞接受各种信号从而引发各种不同的效应；进入效应期后，经过一些决定细胞命运（存活/死亡）的分子调控点，细胞进入不可逆的程序化死亡，这些调控分子包括一系列原癌基因和抑制癌基因的产生，其中Bcl-2家族起着决定性的作用；降解期则产生可见的凋亡现象。

最初在血液淋巴细胞中发现Bcl-2能抑制细胞死亡，随后陆续在其它一些细胞中也发现Bcl-2的这种作用。但近年来研究发现，除这些之外尚存在Bcl-2不敏感的凋亡途径。

应用^[4][5]

用于BOK对睾丸癌细胞恶性生物学行为的影响及可能机制的研究

应用免疫组织化学及蛋白质印迹的方法来检测BOK蛋白在10例睾丸癌及癌旁组织中的表达情况,通过BOK过表达及敲低的方法进一步研究其有关生物学行为及可能的机制。

研究方法:1、本研究收集睾丸癌及相应癌旁组织10例,标本通过固定包埋,HE染色后经病理医师明确诊断。2、应用免疫组织化学染色方法检测BOK抗体在睾丸癌组织及对应癌旁组织中蛋白表达情况。

3、细胞培养和转染:两个TC细胞系(TCam-2和I-10)和正常睾丸Hs1.Tes购自美国典型培养物保藏中心,在含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素钠、100 mg/ml链霉素的DMEM和F-12K培养基中培养。当细胞生长达到50-70%汇合时,使用DNA转染试剂转染细胞。

4、Western blot分析:使用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳提取总蛋白质,然后转移到硝酸纤维素膜上。印迹膜与1:500稀释的BOK抗体或胱天蛋白酶-3/裂解的半胱天冬酶-3抗体一起温育。洗涤后,将膜与辣根过氧化物酶连接的山羊抗兔1:2000稀释液一起温育。使用Eas ySee Western印迹试剂盒进行测定。

5、CCK8分析:转染后24小时将细胞消化,计数,接种于96孔板中,培养0,12,24,36和48小时,最后使用细胞计数试剂盒进行评估。

参考文献

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[2]BOK displays cell death‐independent tumor suppressor activity in non‐small‐cell lung carcinoma[J].Erika Moravcikova,Evzen Krepela,Vera S.Donnenberg,Albert D.Donnenberg,Kamila Benkova,Tatiana Rabachini,Yuniel Fernandez‐Marrero,Daniel Bachmann,Thomas Kaufmann.International Journal of Cancer.2017(10)

[3]Health Disparities in the Appropriate Management of Cryptorchidism[J].Kate B.Savoie,Marielena Bachier-Rodriguez,Elleson Schurtz,Elizabeth A.Tolley,Dana Giel,Alexander Feliz.The Journal of Pediatrics.2017

[4]The epigenetics of testicular germ cell tumors:looking for novel disease biomarkers[J].Ana Laura Costa,Joã,o Lobo,Carmen Jeró,nimo,Rui Henrique.Epigenomics.2017(0)

[5]焦玉涛.BOK对睾丸癌细胞恶性生物学行为的影响及可能机制的研究[D].新乡医学院,2019.