抗波形蛋白小鼠单克隆抗体的应用

背景^[1-3]

抗波形蛋白小鼠单克隆抗体是以波形蛋白为抗原以小鼠为宿主制得的免疫抗体，可以特异性结合波形蛋白。主要用于检测波形蛋白的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

波形蛋白（Vimentin）是中间丝的其中一种蛋白质。一个波形蛋白单体，与其他中间丝相似，有着一个中央α螺旋结构域，在前端盖着一个非螺旋的胺基，及于末端盖着一个羧基。两个单体会互相扭曲，形成一个卷曲螺管形状的二聚物。

一个波形蛋白单体，与其他中间丝相似，有着一个中央α螺旋结构域，在前端盖著一个非螺旋的胺基，及于末端盖著一个羧基。两个单体会互相扭曲，形成一个卷曲螺管形状的二聚物。两个二聚物会进一步形成一个四聚物，再与其他四聚物相连成为一片。

α螺旋序列包含一组疏水的氨基酸，这组氨基酸在螺旋表面形成一层“疏水性屏障”。这度屏障容许两个螺旋互相卷曲。再者，当中有著周期性分布的酸性及碱性氨基酸，能平衡卷曲螺旋二聚物。在带电苛的剩余物之间距是建立离子盐桥的地方，同样能稳定α螺旋结构。有科学家认为这道盐桥不但可以提供内链的相互作用，当它由盐桥转为离子外链连结时，可以造成中间丝。

应用^[4][5]

用于丙烯酰胺对小鼠睾丸细胞毒性作用及其与波形蛋白表达关系的研究

将7～8周龄40只清洁级健康雄性昆明种小鼠随机分为4组,每组10只。用不同剂量的AA(0、10、20、40mg/kg)对小鼠连续灌胃5w,每周6天,其中0mg/kg给予等体积蒸馏水,即正常对照组。于首次染毒AA后第36天处死小鼠,采用组织病理学技术(HE染色),流式细胞术(FCM),TUNEL法,免疫组织化学法,RT-PCR技术,分别从组织学水平,细胞水平,DNA水平,蛋白水平及mRNA水平,分析AA致睾丸细胞凋亡及其与波形蛋白表达的关系。

免疫组化结果显示,20mg/kg组和40mg/kg组波形蛋白表达的平均光密度值较正常对照组明显减少(P<0.05),1 Omg/kg较正常对照组减少但无统计学差异(P>0.05)。

结论1.在本实验条件下,三种方式染毒AA均可致雄性小鼠睾丸细胞产生DNA损伤,使小鼠睾丸早期精细胞微核发生率升高,且以灌胃染毒方式产生的毒性作用最为敏感；

2. AA诱导可使小鼠睾丸曲细精管各级生精细胞减少,管腔内成熟精子减少。

3.AA可以降低精原细胞转化为精子的效能,使精子细胞和精子数量减少,使生精过程发生障碍。其致细胞凋亡作用的靶细胞可能是精原细胞。AA诱导可使生精上皮凋亡指数增加,且有剂量依赖性。

4.AA使得波形蛋白及mRNA的表达显著减少,且主要是间质细胞中的波形蛋白表达减少。推测AA生殖毒性作用的可能机制为AA染毒使波形蛋白mRNA表达减少,从而导致波形蛋白生成减少。

5.AA致睾丸生精细胞凋亡与波形蛋白表达的减少有一定的相关性。

参考文献

[1]Intermediate vimentin filaments and their role in intracellular organelle distribution[J].A.A.Minin,M.V.Moldaver.Biochemistry(Moscow).2008(13)

[2]Novel functions of vimentin in cell adhesion,migration,and signaling[J].Johanna Ivaska,Hanna-Mari Pallari,Jonna Nevo,John E.Eriksson.Experimental Cell Research.2007(10)

[3]Expression profile of human cells in culture exposed to glycidamide,a reactive metabolite of the heat-induced food carcinogen acrylamide[J].Flurina C.Clement,Ramiro Dip,Hanspeter Naegeli.Toxicology.2007(1)

[4]A Review of the Toxicology of Acrylamide[J].J.H.Exon.Journal of Toxicology and Environmental Health,Part B.2006(5)

[5]张晓玲.丙烯酰胺对小鼠睾丸细胞毒性作用及其与波形蛋白表达关系的研究[D].山西医科大学,2010.