Rabbit anti-PKC alpha Polyclonal Antibody的应用

背景^[1-3]

Rabbit anti-PKC alpha Polyclonal Antibody是以anti-PKC alpha为抗原以兔为宿主制得的免疫抗体，可以特异性结合PKC alpha。主要用于检测PKC alpha的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

PKC的所有亚类都由一条单肽链组成（图8-11），分子量大约为67-83kDa，其结构可分为四个保守区C1-C4（mPKC和aPKC缺少C2区）和五个可变区V1-V5。基中C1区可能是膜结合区，并且含有富含半胱氨酸的随机重复序列Cys-X2-Cys-X13(14)-Cys-X2-Cys-X7-Cys-X7-Cys（X代表任何一种氨基酸），这段顺序与在许多金属-蛋白质及转录调节有关的DNA结合蛋白中的半胱氨酸-锌-DNA结合指形区（cysteine-Zinc-DNabinding finger）保守顺序Cys-X2-Cys-X13-Cys-X2-Cys相似。

对PKC的多肽片段进行分析发现，该序列与佛波酯和二酰基甘油（DAG）的结合有关。C2区与PKC对Ca2+的敏感性有关。C1和C2在结构上不同于其它蛋白激酶，能结合Ca2+、磷脂、DAG和TPA，因此C1和C2区又称为调节区。C3区包括一个ATP结合序列Gly-X-Gly-X-X-Gly-Lys,该区域与其它蛋白激酶的ATP结合位点具有很高的同源性，又称催化区。C4区包含一个底物结合区，是识别磷酸化底物所必需的。

已发现了至少11种亚型,其结构有一定的保守性而又有所差别,导致其功能和调控的多样性。新合成的PKC一般需要经历活化茎环(Activation-loop,A-loop)、转角模体(Turn motif,TM)以及疏水模体(hydrophobic motif,HM)的程序性磷酸化过程才能成熟,获得进一步活化的功能。

应用^[4][5]

用于PKCα和p38MAPK通路在电针刺介导的兔内毒素休克急性肺损伤血红素氧合酶-1表达上调中的作用研究

探讨PKCa和p38MAPK信号通路在电针刺介导的兔内毒素休克急性肺损伤时HO-1表达上调中的作用。

方法健康雄性新西兰大白兔140只,体重1.5～2.0kg,2月龄,实验分成两部分进行,每部分70只,均采用随机数字表法,将其分为7组(n=10),假手术组(S)、无水乙醇组(AL)、PKC阻断剂白屈菜赤碱组(CHE)、内毒素休克急性肺损伤组(L)、电针刺+内毒素休克急性肺损伤组(EA)、假针刺+内毒素休克急性肺损伤组(NEA)、电针刺+内毒素休克急性肺损伤+白屈菜赤碱组(EAC)。

假手术组(S)、无水乙醇组(AL)、p38MAPK特异阻断剂SB203580组(SB)、内毒素休克肺损伤模型组(M)、电针刺+内毒素休克肺损伤模型组(EAM)、假针刺+内毒素休克肺损伤模型组(SEAM)、电针刺+内毒素休克肺损伤模型+SB203580组(EAMS)。EA组、EAC组和EAM组、EAMS组电针刺激双侧足三里和肺俞穴,疏密波,频率2/15Hz,刺激强度1-2mA,以兔出现轻微肌颤为宜,30min次,1次/d,连续5d(1-4d进行电针刺预处理),实验当天电针刺激从给予LPS持续至实验结束；NEA组和SEAM组刺激双侧足三里和肺俞穴旁开0.5cm非经非穴处。

L组、EA组、NEA组、EAC组和M组、SEAM组、EAM组、EAMS组耳缘静脉注射LPS5mg/kg(溶于2ml生理盐水),其余组给予等容量生理盐水。在静脉注射LPS或生理盐水前0.5h,EAC组和CHE组腹腔注射白屈菜赤碱8mg/kg(溶于0.5ml无水乙醇中),SB组和EAMS组静脉注射SB2035805μmol/kg(溶于0.5ml无水乙醇),S组静脉注射等容量生理盐水,其余各组静脉注射无水乙醇0.5m1。静脉注射LPS各组以MAP在2h内下降至基础值75%为模型成功标志。

静脉注射LPS(或生理盐水)6h时,右颈内动脉取血,测定血清TNF-α浓度,处死大白兔取肺组织,观察病理学结果并进行病理学评分,测定肺湿/干重比率(W/D)以及MDA含量和SOD活性；采用western blot法测定HO-1和PKCa或p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达；采用荧光定量PCR法测定HO-lmRNA和PKCαmRNA表达。

参考文献

[1]Role of HO-1 in protective effect of electro-acupuncture against endotoxin shock-induced acute lung injury in rabbits[J].Yu Jianbo,Dong Shuan,Luo Xiaoqing,Gong Lirong,Zhang Yuan,Wang Man,Cao Xinshun,Liu Daquan.Experimental Biology and Medicine.2013(6)

[2]The Anti-inflammatory Mechanism of Heme Oxygenase-1 Induced by Hemin in Primary Rat Alveolar Macrophages[J].Chen Hualin,Xu Wenli,Liu Dapeng,Li Xijing,Pan Xiuhua,Pang Qingfeng.Inflammation.2012(3)

[3]Reactive oxygen species and PI3K/Akt signaling play key roles in the induction of Nrf2-driven heme oxygenase-1 expression in sulforaphane-treated human mesothelioma MSTO-211H cells[J].Yoon-Jin Lee,Hyang-Yun Jeong,Yong-Bae Kim,Yong-Jin Lee,Seong Youn Won,Jung-Hyun Shim,Moon-Kyun Cho,Hae-Seon Nam,Sang-Han Lee.Food and Chemical Toxicology.2011(2)

[4]Targeting the Nrf2–Keap1 antioxidant defence pathway for neurovascular protection in stroke[J].Alessio Alfieri,Salil Srivastava,Richard C.M.Siow,Michel Modo,Paul A.Fraser,Giovanni E.Mann.The Journal of Physiology.2011(17)

[5]张桂诚.PKCα和p38MAPK通路在电针刺介导的兔内毒素休克急性肺损伤血红素氧合酶-1表达上调中的作用[D].天津医科大学,2014.