ANTI-NEUN抗体的应用

背景^[1-3]

ANTI-NEUN抗体是用人工合成的人NEUN蛋白进行适当修饰后免疫rabbit，然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度抗体。ANTI-NEUN抗体可以识别的是总NEUN，可以检测内源性的NEUN蛋白水平。

脊椎动物神经元特异核蛋白命名为NeuN。该抗体可以与中枢神经系统多种类型的神经细胞反应，包括来自小脑、大脑皮层、海马体、丘脑和脊髓的细胞；也可以与外周神经系统的神经元反应，包括来自脊神经节、交感神经节和肠壁神经丛。神经核：在中枢神经系统内，形态和功能相似的神经元胞体及其树突聚集在一起形成的灰质团块，称为神经核。

在中枢神经系统内由功能相同的多个神经细胞体集聚在一起而形成的集团，叫神经核。人体中枢神经系统内有很多神经核，其中最重要的有发出12对脑神经的神经核和基底神经核等。各神经核有特殊的生理功能，如发生病变，则有明显的临床体征。

脑神经核团的神经元胞体集群于脑干和脊髓颈段，因神经元的类型或神经纤维包绕程度的差异而得以与其附近的神经元群相区分。在免疫组化中，抗体染色主要是神经元的核染色，同时伴随着细胞质的浅染。浦肯野氏细胞和冠状光感受细胞不与该抗体反应。

通常，只有神经元细胞有丝分裂后期才能短暂地观察到该抗体的免疫反应，而在细胞增殖时期NeuN不表达。NeuN是一个非常好的参考依据，表达于成熟的神经元和视黄酸激发的P19细胞。尤其是用于研究移植来的神经元细胞，这种抗体是非常有效的。

应用^[4][5]

用于人胚胎脊髓发育中Nestin，NeuN，GFAP的表达变化及凋亡细胞的检测研究

探讨人胚胎脊髓发育过程中神经干细胞、神经元、星形胶质细胞的发育变化和规律以及细胞凋亡的变化。

[方法]采用免疫组织化学方法检测神经干细胞、神经元、星形胶质细胞的标记蛋白Nestin,NeuN,GFAP在3w～8m人胚胎脊髓中的表达及变化;应用TUNEL法检测3w～8m人胚胎脊髓中的原位凋亡细胞。

[结果]1.Nestin染色结果:Nestin在整个人胚胎脊髓发育过程中均可见到,3w即可在神经管见到阳性细胞;5w～6w,阳性细胞在神经上皮背侧较腹侧多,套层、边缘层中阳性细胞开始出现并增多,脊神经节内可见阳性反应物;7w～8w,套层可见大量突起较长的阳性细胞(P＜0.05);10w～11w以后神经上皮、灰白质内阳性细胞密度和强度均逐渐减少,中央管、白质阳性细胞于3m、5m后趋于稳定,灰质内可见少量有短突起的阳性细胞。

2.NeuN染色结果:NeuN阳性细胞在5w的套层中始见,数量少且染色浅,边缘层未见NeuN阳性细胞;6w～7w,阳性细胞明显增多,尤以基板为甚,脊神经节内也可见到阳性细胞;8w～9w,套层内阳性细胞进一步增多(P＜0.05);10w,腹角内阳性细胞有所减少,后根处始见少量阳性细胞;11w～3m,灰质内阳性细胞数明显降低(P＜0.05),腹角见体积较大、胞核深染的运动神经元;4m～6m,灰质内的阳性细胞数继续减少(P＜0.05),后根处阳性细胞减少(P＜0.05);7m～8m,灰质内阳性细胞数量未有明显变化。

参考文献

[1]Long-term cultivation of multipotential neural stem cells from adult rat subependyma[J].Glenn T.Gobbel,Seung-Jin Choi,Steven Beier,Ajay Niranjan.Brain Research.2003(2)

[2]Neuroprotection of glial cell line‐derived neurotrophic factor in damaged spinal cords following contusive injury[J].HenrichCheng,Jey‐PeiWu,Shun‐FenTzeng.J.Neurosci.Res..2002(3)

[3]Ciliary Neurotrophic Factor Activates Spinal Cord Astrocytes,Stimulating Their Production and Release of Fibroblast Growth Factor-2,to Increase Motor Neuron Survival[J].Phillip J.Albrecht,John P.Dahl,Olivia K.Stoltzfus,Robert Levenson,Steven W.Levison.Experimental Neurology.2002(1)

[4]Neural stem cells and regulation of cell number[J].Lukas Sommer,Mahendra Rao.Progress in Neurobiology.2002(1)

[5]高燕.人胚胎脊髓发育中Nestin，NeuN，GFAP的表达变化及凋亡细胞的检测[D].昆明医学院,2008.