ANTI-MMP9抗体的应用

背景^[1-3]

ANTI-MMP9抗体是以ANTI-MMP9为抗原制得的免疫抗体，可以特异性结合ANTI-MMP9。主要用于检测ANTI-MMP9的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

无机金属蛋白酶（MMP）家族的蛋白质参与正常生理过程中细胞外基质的分解，如生长发育，生殖和组织重塑，以及疾病过程中，如关节炎和转移。该基因编码的酶降解IV型和V型胶原。对恒河猴的研究表明，这种酶参与了IL-8诱导的骨髓造血祖细胞。动员，而小鼠的研究表明，这种酶在肿瘤相关组织重塑中发挥了作用。

基质金属蛋白酶（MMP）家族的蛋白质在正常生理过程（例如胚胎发育，繁殖和组织重塑）以及疾病过程（例如关节炎和转移）中参与细胞外基质的分解。大多数MMP被分泌为无活性的前蛋白，当被细胞外蛋白酶切割时被激活。该基因编码的酶降解IV型和V型胶原。在恒河猴中的研究表明，该酶参与了IL-8诱导的骨髓造血祖细胞的动员，而鼠类研究表明，其在肿瘤相关的组织重塑中起作用。

MMP9(Matrix metalloproteinase-9基质金属蛋白酶)，其主要作用是维持细胞外基质的动态平衡。MMP9是由707个氨基酸组成的大小为77kd的蛋白质，其启动子区具有转化生长因子-β抑制元件、ETS结合位点和核因子（NF）κB，MMPs主要由3个独特的、保守的结构域构成，包括催化区和羧基末端区、氨基末端区。

应用^[4][5]

用于转化生长因子β1通过ROS依赖的ERK-NF-KB通路对血管平滑肌细胞产生MMP9的影响研究

研究ROS在TGF-β1刺激血管平滑肌细胞产生MMP9的过程中是否发挥作用。

方法：按照设计的不同浓度给予N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)预作用VSMC1小时,再给予10ng/m1的TGF-β1作用24小时。提取培养基上清,明胶酶谱法检测培养基中蛋白酶的活性,裂解细胞提取蛋白检测细胞中Western Blot检测细胞中MMP9的表达。

VSMC接种于六孔板,原位装载DCFH-DA探针,样本分为A,B二组,A组：给予lOng/ml TGF-β1,B组：给予NAC(5mM)预作用1小时后再给予同等浓度的TGF-β1干预,用酶标仪观测3-240min的荧光强度,并在倒置荧光显微镜下观察并拍照。

取无血清同步后的VSMC,给予或者不给予NAC(5mM)预作用后,分别给予不同浓度的H2O2TGF-β1作用24小时,然后提取培养基上清明胶酶谱法检测培养基中蛋白酶的活性,并裂解细胞提取蛋白,Western Blot检测细胞中MMP9的表达。

结果：5mM NAC明显的抑制了TGF-β1刺激血管平滑肌细胞MMP9表达和分泌的增高。TGF-β1刺激使平滑肌细胞内ROS明显增加,30分钟就达到高峰,而NAC预作用后再给予TGF-β1则ROS不会明显增高。1mM H2O2会刺激VSMC表达和分泌MMP9的显著增高,但是这种改变可以被NAC(5mM)完全抑制。

参考文献

[1] 钙网蛋白基因缺陷细胞中MMP2和MMP9的表达及其调节机制[D].吴旻.汕头大学2005

[2] Ummuhani Ozel Turkcu,Nilay Yuksel,Emine Akcay,et al.Assessment of COL1A1 and MMP9 expression in patients with dermatochalasis.2020,40(8):1987-1992.

[3] Darrell Green,Heather Eyre,Archana Singh,et al.Targeting the MAPK7/MMP9 axis for metastasis in primary bone cancer.2020,39(33):5553-5569.

[4] Chuanwen Zhao,Guohui Yuan,Yuemei Jiang,et al.Capn4 contributes to tumor invasion and metastasis in gastric cancer via activation of the Wnt/β-catenin/MMP9 signalling pathways.2020,395(2)

[5]张浩.转化生长因子β1通过ROS依赖的ERK-NF-KB通路对血管平滑肌细胞产生MMP9的影响[D].武汉大学,2013.