兔抗人IL-6抗体的应用

背景^[1-3]

兔抗人IL-6抗体是以人IL-6为抗原以兔为宿主制得的免疫抗体，可以特异性结合人IL-6。主要用于检测人IL-6的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

白细胞介素6（IL-6）是白细胞介素的一种，其作为促炎细胞因子和抗炎性肌球蛋白起作用。人类中的IL-6由IL-6基因编码。此外，成骨细胞能够分泌IL-6以刺激破骨细胞形成，许多血管的中膜中的平滑肌细胞也产生IL-6作为促炎细胞因子。IL-6作为抗炎性肌球蛋白的作用是通过其对TNF-α和IL-1的抑制作用以及IL-1ra和IL-10的活化来介导的。

IL-6功能

（1）IL-6是发热和急性期反应的重要媒介。

（2）它能够穿过血脑屏障并在下丘脑中开始合成PGE2，从而改变身体的温度设定点。

（3）在肌肉和脂肪组织中，IL-6刺激能量流动，导致体温升高。

（4）IL-6由巨噬细胞响应特定的微生物分子分泌，称为病原体相关的分子模式（PAMP）。这些PAMP与先天免疫系统的一组重要检测分子结合，称为模式识别受体（PRR），包括Toll-like受体（TLRs）。它们存在于细胞表面和细胞内室中，并诱导细胞内信号级联引起炎性细胞因子的产生。

（5）IL-6的抑制剂（包括雌激素）用于治疗绝经后的骨质疏松症。

（6）脂肪细胞也可产生IL-6，并且被认为是肥胖个体具有更高内源性CRP水平的原因。

（7）IL-6负责刺激急性期蛋白质合成，以及骨髓中中性粒细胞的产生。它支持B细胞的生长并且对调节性T细胞具有拮抗作用。

（8）当遭遇心理应激时，人体会产生像皮质醇这样的应激荷尔蒙，它能够引发白细胞介素-6释放到循环中。

应用^[4][5]

用于人IL-6高亲和力拮抗肽的合理设计及功能评价研究

基于hIL-6/hIL-6R复合物的晶体结构,从理论上选定重要的功能活性位点（hIL-6的AB环以及螺旋-A、D的C末端）为靶标,合理设计出具有潜在功能的hIL-6拮抗肽,并选择XG-7、M1细胞对其拮抗功能进行评价。

（1） 基于hIL-6/hIL-6R复合物的晶体结构合理设计hIL-6拮抗肽基于hIL-6/hIL-6R复合物的晶体结构,从理论上确定hIL-6与hIL-6R相互作用的重要区域。以hIL-6AB环区和螺旋A、D的C末端和为靶标,合理设计出hIL-6拮抗肽PT。理论分析结果表明,拮抗肽PT在体外能够有效地模拟hIL-6的作用竞争结合hIL-6R。

（2）hIL-6R胞外段及突变体蛋白的表达、纯化、功能及拮抗肽PT竞争hIL-6结合hIL-6R的评价以cDNA-514为模板,将hIL-6R胞外段基因hIL-6R-EC05和缺失突变体hIL-6R-EC70（缺失Ig区）定向克隆到原核表达载体pET32a（+）中,IPTG诱导表达后经Ni2+整合柱纯化,通过Western blot进行鉴定。ELISA结合实验证实Ig区在hIL-6R中仅起到稳定蛋白结构的作用,对于hIL-6和hIL-6R的作用影响不大。竞争ELISA结合实验表明,拮抗肽PT在体外能够有效地模拟hIL-6。

参考文献

[1]Interleukin-6 as a central mediator of cardiovascular risk associated with chronic inflammation,smoking,diabetes,and visceral obesity:down-regulation with essential fatty acids,ethanol and pentoxifylline[J].M.F.McCarty.Medical Hypotheses.1999(5)

[2]The roles of interleukin-6 and interleukin-10 in B cell hyperactivity in systemic lupus erythematosus[J].J.T.Cross,H.P.Benton.Inflammation Research.1999(5)

[3]人白细胞介素-6受体胞外区配基结合功能域活性部位的三维构效关系[J].任蕴芳,冯健男,曲红,李松,沈倍奋.中国科学C辑:生命科学.2000(02)

[4]分子克隆实验指南[M].科学出版社,[美]萨姆布鲁克(Sambrook,J·)等著,1992

[5]杨镇珲.人IL-6高亲和力拮抗肽的合理设计及功能评价[D].中国人民解放军军事医学科学院,2005.