兔抗猪IGG H&L (HRP)的应用

背景^[1-3]

兔抗猪IGG H&L(HRP)是以猪IGG H&L为抗原的HRP山羊多克隆抗体，可以特异性结合猪IGG H&L。兔抗猪IGG H&L(HRP)主要用于ICC/IF,Dotblot,ELISA,IHC-P,IHC-Fr,Immunomicroscopy,WB等猪IGG H&L检测实验。

抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。

B淋巴细胞在抗原刺激下转化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的抗体，称为免疫球蛋白。免疫球蛋白G（IgG）是血清中免疫球蛋白的主成分，约占血清中免疫球蛋白总含量的75%。IgG有4个亚型，即IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。IgG是体内最主要的抗体，具有抗病毒、中和病毒、抗菌及免疫调节的功能。

IgG也是唯一能够通过胎盘的抗体，在新生儿抗感染中起重要作用。有些自身抗体，如系统性红斑狼疮的LE因子，抗甲状腺球蛋白抗体也属于IgG。检测血清中的IgG含量，最常用的方法是单向免疫扩散法和免疫比浊法，但后者已逐渐代替前者。

检测机体免疫球蛋白的含量可了解机体的体液免疫功能状态，帮助诊断免疫增生、免疫缺陷、感染及自身免疫性等多种疾病，具有重要的临床意义。

1.血清IgG增高：见于系统性红斑狼疮、萎缩性门静脉性肝硬变、慢性活动性肝炎、类风湿性关节炎、亚急性细菌性心内膜炎、IgG型骨髓瘤、某些感染性疾病、IgG型单克隆丙种球蛋白病等。

2.血清IgG减少：见于抗体缺乏症、免疫缺陷综合征、非IgG型多发性骨髓瘤、重链病、轻链病、肾病综合征、某些白血病、烧伤、变应性湿疹、天疱疮、肌紧张性营养不良等。

应用^[4][5]

用于天然鼠源单链抗体库的构建及猪IgG的筛选

采用噬菌体抗体库这一新兴的生物学技术,采用未经免疫过的小鼠,取其脾细胞提取mRNA,经逆转录PCR扩增出抗体重链和轻链可变区基因,大小分别为360bp和320bp左右,纯化回收的VH与VL在接近等摩尔浓度下,先采用含有Linker片段的引物将Linker片段连接到VL基因片段上去,然后与VH片段组装成单链抗体基因(ScFv),再用带有限制性内切酶位点的引物(5’端SfiI,3’端NotI)扩增ScFv基因片段,获得大小约750bp的目的片段,纯化后分别用SfiI和NotI消化,与SfiI/NotI双酶切的载体pCANTAB-5E连接,化学法转化大肠杆菌TGI感受态细胞。

转化菌经辅助噬菌体M13K07挽救后,得到天然鼠源噬菌体抗体库(Barbas et al,1993)。提取质粒经PCR初步鉴定,证明有外源片段插入且其大小与目的片段一致。

在成功构建天然鼠源单链抗体库的基础上,以猪IgG为靶抗原对噬菌体抗体库进行了三轮“吸附-扩增-洗脱”的富集过程,从而得到了猪IgG的次级噬菌体抗体库。用富集后的库液铺板并挑取单菌落制备噬菌体抗体,进行ELISA检测,得到了预期的效果。

参考文献

[1]Isolation of human scFv antibody fragments against ABO blood group antigens from a phage display library[J].E.Santos‐Esteban.Vox Sanguinis.2001(3)

[2]Methods for the generation of chicken monoclonal antibody fragments by phage display[J].Jennifer Andris-Widhopf,Christoph Rader,Peter Steinberger,Roberta Fuller,Carlos F Barbas III.Journal of Immunological Methods.2000(1)

[3]Single-chain antibody fragments specific to the hepatitis B surface antigen,produced in recombinant tobacco cell cultures[J].Nadia Ramírez,Damaris Lorenzo,Daniel Palenzuela,Lissett Herrera,Marta Ayala,Alejandro Fuentes,Marlene Pérez,Jorge Gavilondo,Pedro Oramas.Biotechnology Letters.2000(15)

[4]Combining phage display and screening of cDNA expression libraries:a new approach for identifying the target antigen of an scFv preselected by phage display 1 1 Edited by J.Wells[J].S Barth,U Weidenmüller,M.K Tur,M.F.G Schmidt,A Engert.Journal of Molecular Biology.2000(4)

[5]邵建军.天然鼠源单链抗体库的构建及猪IgG的筛选[D].山东农业大学,2004.