小鼠抗GAPDH单克隆抗体的应用

背景^[1-3]

小鼠抗GAPDH单克隆抗体是一类可以特异性结合GAPDH的鼠源单克隆抗体，主要用于检测GAPDH的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中GAPDH水平。用纯化的GAPDH抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入GAPDH，再与HRP标记的GAPDH抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的GAPDH呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中GAPDH浓度。

GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）的英文缩写。GAPDH是糖酵解反应中的一个酶，广泛分布于各种组织中的细胞。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。因为GAPDH作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。

应用^[4][5]

用于海洋鱼类细菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究

对海洋鱼类病原微生物GAPDH蛋白的定位研究中,成功克隆了六种病原菌GAPDH编码基因,并实现了六个基因在大肠杆菌中的重组表达；进一步制备了迟钝爱德华氏菌EIB202重组蛋白GAPDH的多克隆抗体；在此基础上通过Western blotting、间接免疫荧光观察、流式细胞仪分析等,发现选取的六种鱼类重要病原菌迟钝爱德华氏菌、鲶鱼迟钝爱德华氏菌、嗜水气单孢菌、鳗弧菌、溶藻弧菌和哈维氏弧菌中GAPDH蛋白均有向胞外分泌,同时细胞表面也有分布。

而以斑马鱼为实验对象的GAPDH重组蛋白相对免疫保护率分析表明,来源于不同病原菌的重组蛋白均具有明显的免疫保护作用,且相互间有一定的交叉免疫保护。最后分析了迟钝爱德华氏菌EIB202的GAPDH过表达菌株对EPC细胞的侵染能力,结果发现GAPDH与病原菌的黏附有一定的相关性。上述研究结果的取得为未来利用GAPDH蛋白作为广谱型保护性抗原蛋白,开发针对养殖水体多病原的亚单位疫苗提供了优选靶标,而迟钝爱德华氏菌中GAPDH蛋白功能的初步分析,则为后续其在鱼类致病机制中的功能研究奠定了基础。

参考文献

[1]QseBC controls flagellar motility,fimbrial hemagglutination and intracellular virulence in fish pathogen Edwardsiella tarda[J].Xin Wang,Qiyao Wang,Minjun Yang,Jingfan Xiao,Qin Liu,Haizhen Wu,Yuanxing Zhang.Fish and Shellfish Immunology.2011(3)

[2]Isolation and characterisation of EfeM,a periplasmic component of the putative EfeUOBM iron transporter of Pseudomonas syringae pv.syringae[J].Mohan B Rajasekaran,Sue A Mitchell,Trevor M Gibson,Rohanah Hussain,Giuliano Siligardi,Simon C Andrews,Kimberly A Watson.Biochemical and Biophysical Research Communications.2010(3)

[3]A novel multivalent vaccine based on secretary antigen-delivery induces protective immunity against Vibrio anguillarum and Aeromonas hydrophila[J].Lingyun Zhou,Xiuhua Wang,Qin Liu,Qiyao Wang,Yan Zhao,Yuanxing Zhang.Journal of Biotechnology.2010(1)

[4]Characterization of OmpK,GAPDH and their fusion OmpK–GAPDH derived from Vibrio harveyi outer membrane proteins:their immunoprotective ability against vibriosis in large yellow croaker(Pseudosciaena crocea)[J].C.Zhang,L.Yu,R.Qian.Journal of Applied Microbiology.2007(5)

[5]李小勇.海洋鱼类细菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究[D].华东理工大学,2011.