HRP山羊抗小鼠IGG1的应用

背景^[1-3]

HRP山羊抗小鼠IGG1是一类可以特异性结合小鼠IGG1的多克隆抗体，主要用于检测小鼠IGG1的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中小鼠IGG1水平。用纯化的小鼠IGG1抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小鼠IGG1，再与HRP标记的小鼠IGG1抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠IGG1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠IGG1浓度。

IgG亚类是指lgG1-lgG3与抗原形成免疫复合物，通过经典途径活化补体，发挥溶菌、溶细胞等作用。

根据免疫球蛋白G分子中γ链抗原性差异，人免疫球蛋白G有4个亚类：免疫球蛋白G 1、免疫球蛋白G 2、免疫球蛋白G 3和免疫球蛋白G 4（小鼠4个亚类是免疫球蛋白G 1、免疫球蛋白G 2a、免疫球蛋白G 2b和免疫球蛋白G 3）。其中免疫球蛋白G 3γ3铰链区含有62个氨基酸残基，具有4个重复γ1铰链区（15个氨基酸残基）的串连结构，重链间二硫键数量多，约10～15个，因此易被蛋白酶裂解，半衰期也较短。

应用^[4][5]

用于TLR2-STAT3通路在过敏性炎症发病机制的作用研究

建立小鼠致敏模型,通过观察TLR2基因敲除小鼠肺组织STAT3表达及炎症指标的改变,探讨TLR2-STAT3通路在过敏性炎症发病机制中的作用。

方法:1.实验小鼠分为四组,每组5只,C57Bl/6 OVA组及TLR2-/-OVA组小鼠在第0天和第7天分别腹腔注射OVA致敏液建立致敏模型,C57Bl/6 NS组及TLR2-/-NS组予生理盐水腹腔注射建立对照模型,注射部位、时间及剂量均与前两组相同。

2.HE染色观察肺组织细支气管周围炎症细胞浸润情况,肺泡灌洗液细胞分类计数观察各类炎症细胞的变化。

3.采用ELISA检测外周血中Mouse OVA-IgE,IgA,IgM,IgG1,IgG2a及IgG2b表达水平。

4.采用Real-Time PCR检测肺组织中IL-4、IL-5及IL-13 mRNA表达水平。

5.分别采用免疫组化及免疫荧光方法检测肺组织中STAT3及NF-κB的蛋白表达水平。

6.C57Bl/6小鼠致敏前腹腔注射CPT,剂量为200mg/kg/d,观察CPT对致敏小鼠STAT3、NF-κB及IgG1表达及肺组织炎症细胞浸润的影响。

结果:采用卵白蛋白腹腔注射成功建立了小鼠致敏模型,C57Bl/6小鼠致敏后气道周围炎症细胞浸润明显,肺泡灌洗液中巨噬细胞比例下降,嗜酸性粒细胞比例上升,肺组织中IL-4及IL-13 mRNA表达明显上调,血清IgG1、IgA、IgG2a、IgG2b、IgM及IgE表达均明显上升,以上差异均有统计学意义。

参考文献

[1]Toll‐like receptor‐mediated immune response inhibits prion propagation[J].Sang‐Gyun Kang,Chiye Kim,Leonardo M.Cortez,María Carmen Garza,Jing Yang,Holger Wille,Valerie L.Sim,David Westaway,Debbie McKenzie,Judd Aiken.Glia.2016(6)

[2]Regulation of PHLDA1 Expression by JAK2‐ERK1/2‐STAT3 Signaling Pathway[J].Ji Hyo Lyu,Bin Huang,Dae‐Weon Park,Suk‐Hwan Baek.J.Cell.Biochem..2016(2)

[3]Target-oriented therapy:Emerging drugs for atopic dermatitis[J].Lauffer,Ring.Expert Opinion on Emerging Drugs.2016(1)

[4]TLR2 and TLR4 mediated host immune responses in major infectious diseases:a review[J].Suprabhat Mukherjee,Subhajit Karmakar,Santi Sinha Babu.Brazilian Journal of Infectious Diseases.2015

[5]李玉琴.TLR2-STAT3通路在过敏性炎症发病机制的作用研究[D].苏州大学,2016.