MONOCLONAL ANTI-GAPDH 小鼠抗的应用

背景^[1-3]

MONOCLONAL ANTI-GAPDH小鼠抗是一类可以特异性结合ANTI-GAPDH的单克隆抗体，主要用于检测ANTI-GAPDH的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中ANTI-GAPDH水平。用纯化的ANTI-GAPDH抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入ANTI-GAPDH，再与HRP标记的ANTI-GAPDH抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ANTI-GAPDH呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中ANTI-GAPDH浓度。

GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）的英文缩写。GAPDH是糖酵解反应中的一个酶，广泛分布于各种组织中的细胞。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。因为GAPDH作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。

应用^[4][5]

用于GAPDH过表达及异常聚集在帕金森病发病机制中作用的研究

鱼藤酮对GAPDH的表达、定位及聚集的影响节鱼藤酮对GAPDH的表达、亚细胞定位及糖酵解活性的影响目的研究鱼藤酮对PC12细胞内糖酵解关键酶GAPDH的表达、亚细胞定位及糖酵解活性的影响。

方法鱼藤酮作用于体外培养的神经生长因子诱导分化的PC12细胞，采用FITC-Annexin V／PI染色，用流式细胞仪检测细胞凋亡水平；通过实时荧光定量PCR(real-time PCR)和蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测鱼藤酮对PC12细胞内GAPDH mRNA和蛋白表达水平的影响；使用亚细胞组分分离及Western blot观察GAPDH的亚细胞定位改变；根据比尔定律采用分光光度法测定鱼藤酮处理后细胞内GAPDH糖酵解活性的改变。

结果流式细胞仪检测结果显示，鱼藤酮可时间依赖性的诱发PC12细胞凋亡。实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹分析显示，鱼藤酮处理后细胞内GAPDH mRNA和蛋白表达水平均随时间的延长呈升高趋势；而随处理时间的延长，GAPDH的糖酵解酶活性反而下降；亚细胞组分分离及Western blot进一步证实，鱼藤酮处理后GAPDH主要在细胞核及线粒体组分内增多。

结论鱼藤酮可以诱发GAPDH的过表达、抑制GAPDH糖酵解活性并导致GAPDH亚细胞定位的改变，这可能是鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡的重要机制之一。

参考文献

[1]The increasing role of monoamine oxidase type B inhibitors in Parkinson’s disease therapy[J].Elmer,Bertoni.Expert Opinion on Pharmacotherapy.2008(16)

[2]Role of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in vesicular transport from Golgi apparatus to endoplasmic reticulum[J].A.V.Bryksin,P.P.Laktionov.Biochemistry(Moscow).2008(6)

[3]On the key role played by altered protein conformation in Parkinson’s disease[J].L.F.Agnati,E.Baldelli,N.Andreoli,A.S.Woods,V.Vellani,D.Marcellino,D.Guidolin,K.Fuxe.Journal of Neural Transmission.2008(9)

[4]Chronic inhalation of rotenone or paraquat does not induce Parkinson’s disease symptoms in mice or rats[J].Ana I.Rojo,Carmen Cavada,María Rosa de Sagarra,Antonio Cuadrado.Experimental Neurology.2007(1)

[5]黄金莎.GAPDH过表达及异常聚集在帕金森病发病机制中作用的研究[D].华中科技大学,2009.