兔多克隆抗体TO BAX的应用

背景^[1-3]

兔多克隆抗体TO BAX是一类可以特异性结合BAX的多克隆抗体，主要用于检测BAX的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中BAX水平。用纯化的BAX抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入BAX，再与HRP标记的BAX抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的BAX呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中BAX浓度。

bax基因是人体最主要的凋亡基因，属于bcl-2基因家族，编码的Bax蛋白可与Bcl-2形成异二聚体，对Bcl-2产生阻抑作用。研究发现Bax/Bcl-2两蛋白之间的比例关系是决定对细胞凋亡(Apoptosis)抑制作用强弱的关键因素，因此认为，bax是极重要的促细胞凋亡(Apoptosis)基因之一。Bax的表达更为广泛，它可出现在肝细胞、肾小管上皮细胞、呼吸系上皮细胞和支气管平滑肌、血管平滑肌细胞中。

BAX属于兔抗人多克隆抗体。试验中适用组织为石蜡切片，其阳性部位为细胞浆，阳性对照为乳腺癌，组织处理为热修复。BAX是与BCL-2同源的水溶性相关蛋白，是BCL-2基因家族中细胞凋亡促进基因，BAX的过度表达可拮抗BCL-2的保护效应而使细胞趋于死亡。目前多和BCL-2一起用于肿瘤的研究。

应用^[4][5]

用于中药活骨注射液在兔股骨头缺血性坏死修复过程中VEGF、bFGF、IGF-1、0PG、RANKL、bcl-2、bax和caspase-3的表达情况的实验研究

通过动物实验的方法,从细胞分子水平,研究中药活骨注射液对VEGF、bFGF、IGF-1、OPG、RANKL、bcl-2、bax和caspase-3表达的影响,探讨活骨注射液治疗股骨头缺血性坏死的作用机制,为活骨注射液治疗股骨头缺血性坏死提供理论依据。

研究方法：随机分为两组,即空白组(30只)、模型组(90只)。模型组行兔股骨头坏死动物造模后再随机分为3组：盐水组、对照组、实验组各30只动物。空白组正常饲养,不给予任何药物治疗。盐水组给予0.9%生理盐水0.70ml/次,每三日一次髋关节腔灌注。

对照组给予冠心宁注射液每三日一次髋关节灌注0.70ml/次。实验组给予活骨注射液每三日一次髋关节灌注,剂量0.70ml/次。造模术后两周开始治疗,各组按1、3、6、9、12周时间点分批处死动物,每批每组6只,进行检测。

采用免疫组化、Real-time PCR及Western blot三种方法检测兔股骨头缺血性坏死修复过程中VEGF、bFGF、IGF-1蛋白的表达情况。

参考文献

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[3]Comparative analysis of serum proteomes:discovery of proteins associated with osteonecrosis of the femoral head[J].Xiaoyun Tan,Daozhang Cai,Yaoliang Wu,Bin Liu,Limin Rong,Zhusheng Chen,Qichun Zhao.Translational Research.2006(3)

[4]Differential Regulation of Telomerase in Endothelial Cells by Fibroblast Growth Factor‐2 and Vascular Endothelial Growth Factor‐A:Association with Replicative Life Span[J].ELISABETHTRIVIER,DAVID J.KURZ,YINGHONG,HSIU‐LINHUANG,JORGE D.ERUSALIMSKY.Annals of the New York Academy of Sciences.2006(1)

[5]张文进.中药活骨注射液在兔股骨头缺血性坏死修复过程中VEGF、bFGF、IGF-1、0PG、RANKL、bcl-2、bax和caspase-3的表达情况的实验研究[D].黑龙江中医药大学,2016.