Anti-Ubiquitin抗体的应用

背景^[1-3]

Anti-Ubiquitin抗体是一类可以特异性结合Anti-Ubiquitin的多克隆抗体，主要用于检测Anti-Ubiquitin的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中Anti-Ubiquitin水平。用纯化的Anti-Ubiquitin抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Anti-Ubiquitin，再与HRP标记的Anti-Ubiquitin抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Anti-Ubiquitin呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中Anti-Ubiquitin浓度。

ubiquitin是一种76个氨基酸残基的高度保守的热稳定的小分子蛋白质，最初从牛胸腺分离，随后发现存在于所研究的所有组织的细胞中，包括动物、酵母、细菌和高等植物。核内和胞质中均存在，因其极为广泛的分布而得此名。它与蛋白质发生依赖于ATP的反应，结果是其末端与蛋白质的赖氨酸氨基缩合。

蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system(UPS))主要由泛素激活酶(E1)、泛素交联酶(E2)、泛素连接酶(E3)和26S蛋白酶体组成,是降解细胞内蛋白质的主要途径。此过程被一大分子的多蛋白复合体(26S的蛋白酶体:proteasome)所介导，如控制细胞周期的细胞周期蛋白的降解就是由泛素化触发的。这样，细胞有两种降解蛋白的方式：泛素化和溶酶体中的蛋白酶解。这种被修饰过的蛋白迅速降解。

泛素是以多遍栽蛋白前体的形式被合成的，在最后一个重复后，额外存在一个最终氨基酸(如人中是缬氨酸)。人、牛和猪的遍在蛋白以及来自长尾仓鼠、大鼠、兔、光滑爪蟾、黑尾果蝇、地中海蜡实蝇以及昆虫类的泛素具有完全相同的序列。

应用^[4][5]

用于Ubiquitin和p53在胆道系统肿瘤中的表达和意义研究

泛素蛋白和p53在胆道肿瘤与胆道炎性组织的表达差异,试图找到胆道系统肿瘤发生机制,以提供一定的研究基础。

方法:1收集临床标本,标本固定在4%多聚甲醛与PBS的溶液中,4℃,持续24小时,采用免疫组织化学法检测人胆道肿瘤组织、正常胆道组织以及炎性组织中泛素蛋白的表达及其表达水平,分析人胆道肿瘤组织中泛素蛋白的表达情况与不同临床病理情况之间的相关性。

2胆囊癌、胆管癌、结石性胆囊炎胆囊组织收集同方法1,组织块用RIPA裂解液(50mmol·L-1 Tris(PH8.0),150mmol·L-1 NaCl,1mmol·L-1 EDTA,1%NP-40,0.1%SDS),在裂解液中加入蛋白酶抑制剂,按1:100加入。得到总蛋白后,用蛋白电泳检测蛋白中泛素蛋白和p53的表达情况。

3用半定量PCR技术,我们检测胆道肿瘤组织以及相应癌旁组织中泛素mRNA水平。当然,我们首先检测胆管癌细胞系QBC-939的泛素mRNA情况。

结果:1人胆道肿瘤组织中泛素蛋白的表达显著高于正常组织以及炎性组织中泛素蛋白的表达(p<0.05)。泛素蛋白的表达与病理组织学分级有明显关系(p<0.05)。

参考文献

[1]Oncogenic breakdowns in endocytic adaptor proteins[J].Nicola Crosetto,Ritva Tikkanen,Ivan Dikic.FEBS Letters.2005(15)

[2]The ubiquitin-mediated protein degradation pathway in cancer:therapeutic implications[J].Angelika M.Burger,Arun K.Seth.European Journal of Cancer.2004(15)

[3]Distinct monoubiquitin signals in receptor endocytosis[J].Kaisa Haglund,Pier Paolo Di Fiore,Ivan Dikic.Trends in Biochemical Sciences.2003(11)

[4]Unsaturated fatty acids bind Myc–Max transcription factor and inhibit Myc–Max–DNA complex formation[J].Sunah Chung,Seyeon Park,Chul-Hak Yang.Cancer Letters.2002(1)

[5]刘艳雷.Ubiquitin和p53在胆道系统肿瘤中的表达和意义[D].第四军医大学,2009.