小鼠抗EGFR单克隆抗体的应用

背景^[1-3]

小鼠抗EGFR单克隆抗体是一类可以特异性结合EGFR的单克隆抗体，主要用于检测EGFR的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中EGFR水平。用纯化的Anti-ACTA2抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入EGFR，再与HRP标记的EGFR抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的EGFR呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中EGFR浓度。

EGFR是表皮生长因子受体（HER）家族成员之一。该家族包括HER1（erbB1，EGFR）、HER2（erbB2，NEU）、HER3（erbB3）及HER4（erbB4）。HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。

EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）是上皮生长因子（EGF）细胞增殖和信号传导的受体。EGFR属于ErbB受体家族的一种，该家族包括EGFR (ErbB-1),HER2/c-neu(ErbB-2),Her 3(ErbB-3) 和Her 4(ErbB-4)。EGFR也被称作HER1、ErbB1，突变或过表达一般会引发肿瘤。EGFR是一种糖蛋白，属于酪氨酸激酶型受体，细胞膜贯通，分子量170KDa。EGFR位于细胞膜表面，靠与配体结合来激活，包括EGF和TGFα（transforming growth factor α）。激活后，EGFR由单体转化为二聚体，尽管也有证据表明，激活前也存在二聚体。

应用^[4][5]

用于红景天苷对大气细颗粒物致小鼠皮肤衰老的干预作用及初步机制探究

研究发现PM2.5可促进EGFR表达，红景天苷(Salidroside)是中药红景天的主要有效成分。红景天苷抗氧化性强,被称为“天然抗氧化剂”,可清除活性氧。

(1) 探究经气管滴注PM2.5是否影响EGFR表达及诱导小鼠皮肤衰老,同时验证课题组以往研究结果可靠性;(2)探究红景天苷是否干预上述过程;

(2) 完善PM2.5皮肤毒理学;(4)对长期暴露于PM2.5的特殊人群进行科学指导;(5)为开发红景天苷抗皮肤衰老产品提供理论依据。

方法(1)采集某建筑工地处PM2.5并制成干粉;(2)将40只BALB/c雌性小鼠随机均分为生理盐水组及低/中/高剂量PM2.5(1.0、4.8 和 24.0mg/kg)组。经气管滴注液体(1.5ml/kg),1 次/日,连续5日;

(3) 将40只BALB/c雌性小鼠随机均分为高剂量PM2.5+生理盐水组及高剂量PM2.5+低/中/高剂量红景天苷(10.0、20.0和80.0mg/kg)组。经气管滴注PM2.5后予液体灌胃(10.0ml/kg),1次/日,连续5日;

(4) 观察小鼠毛发及皮肤弹性变化;(5)实验结束后24h处死小鼠并采集皮肤组织,实时荧光定量PCR法测定皮肤组织中EGFR mRNA表达量;(6)SPSS及RStudio进行统计学分析。

结论(1)经气管滴注PM2.5后,PM2.5可通过促进EGFR表达诱导皮肤衰老,本课题研究结果与课题组以往结果一致,证实研究结论可靠;(2)红景天苷可通过抑制EGFR表达干预PM2.5诱导的皮肤衰老过程,开发红景天苷抗皮肤衰老产品将具有重要的临床应用价值。

参考文献

[1]PM2.5 Exposure Elicits Oxidative Stress Responses and Mitochondrial Apoptosis Pathway Activation in HaCaT Keratinocytes[J] . Rong Hu,Xiao-Yuan Xie,Si-Ka Xu,Ya-Ning Wang,Ming Jiang,Li-Rong Wen,Wei Lai,Lei Guan.  Chinese Medical Journal . 2017 (18)

[2]Analysis of PM2.5-induced cytotoxicity in human HaCaT cells based on a microfluidic system[J] . Yuxiao Zhang,Lulu Zheng,Jiang Tuo,Qi Liu,Xinlian Zhang,Zhixuan Xu,Sixiu Liu,Guodong Sui.  Toxicology in Vitro . 2017

[3]Involvement of EGF receptor signaling and NLRP12 inflammasome in fine particulate matter‐induced lung inflammation in mice[J] . Yuefei Jin,Weidong Wu,Weiguo Zhang,Yang Zhao,Yongjun Wu,Guoyin Ge,Yue Ba,Qiang Guo,Tianyu Gao,Xuejing Chi,Huiyun Hao,Jing Wang,Feifei Feng.  Environmental Toxicology . 2017 (4)

[4]Recognizing the impact of ambient air pollution on skin health[J] . S. E. Mancebo,S. Q. Wang.  J Eur Acad Dermatol Venereol . 2015 (12)

[5]李慧. 红景天苷对大气细颗粒物致小鼠皮肤衰老的干预作用及初步机制探究[D].南方医科大学,2018.