PERCP标记小鼠抗人CD3单克隆抗体的应用

背景^[1-3]

PERCP标记小鼠抗人CD3单克隆抗体是一类可以特异性结合CD3的单克隆抗体，主要用于检测CD3的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中CD3水平。用纯化的CD3抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CD3，再与HRP标记的CD3抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CD3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中CD3浓度。

在免疫学中，CD3（分化簇3）T细胞的共受体是一种蛋白质复合物，它由四个不同的链组成。在哺乳动物中，该复合物含有一个CD3γ链，CD3δ链，和2 CD3ε链。这些链具有被称为一个分子副T细胞受体（TCR）和ζ-链以产生激活信号的T淋巴细胞。该TCR，ζ链和CD3分子一起构成的T细胞受体复合物。

CD3分子是T细胞的重要标志，由γ、δ、ε、ζ和η五种多肽链组成，它们的胞浆区均含有ITAM，具有传导TCR信号的功能，使T细胞活化。CD3分子与TCR以非共价键结合形成TCR-CD3复合物，其主要功能是把TCR与抗原结合后产生的活化信号传递到细胞内，诱导T细胞活化。

从外周血、骨髓或脐血中分离出的单个核细胞在CD3单克隆抗体和多种细胞因子存在的条件下，经过一定时间培养可以获得具有肿瘤细胞杀伤活性的CIK（Cytokine-induced Killer）细胞。

应用^[4][5]

用于类风湿性关节炎滑膜淋巴细胞CD3、CD4、CD8的表达及意义研究

通过检测类风湿性关节炎患者滑膜组织中淋巴细胞CD3、CD4、CD8的表达及分布状况,探讨其在RA发病中的作用。

方法：收集病理学确诊为RA的手术切除滑膜组织标本40例。另外选取10例骨性关节炎(OA)滑膜组织作为对照组。选取的组织蜡块做41μm的连续切片,采用免疫组织化学方法,分别检测RA组及OA组中多克隆兔抗人CD3抗体、小鼠抗人CD4单抗、小鼠抗人CD8单抗的表达状况。

采用SPSS16.0统计软件包对数据进行分析。计量资料用(x±s)表示,数据比较用配对或独立样本t检验,显著性检验水准α值规定为0.05。

结果：所有RA病例的滑膜组织中均显示中等量或大量淋巴细胞浸润,92.5%(37/40)的病例出现淋巴细胞灶性聚集,甚至出现生发中心,形成淋巴滤泡样结构。

CD3在RA滑膜组织中高表达,而在OA滑膜组织中低表达,CD3+淋巴细胞在RA组中数量显著高于OA组,差异具有统计学意义,(P<0.05)；

浸润的淋巴细胞中CD3表达阳性的淋巴细胞约占淋巴细胞总数的72%；CD4在RA滑膜组织中高表达,而在OA滑膜组织中低表达,CD4+淋巴细胞在RA组中数量显著高于OA组,差异具有统计学意义(P<0.05)；

CD8在RA滑膜组织中高表达,而在OA滑膜组织中低表达,CD8+淋巴细胞在RA组中数量显著高于OA组,差异具有统计学意义(P<0.05)；

参考文献

[1]Clinical impact of radiolabeled anti-CD4 antibodies in the diagnosis of rheumatoid arthritis[J].Kinne,R W,Emmrich,F,Freesmeyer,M.The Quarterly Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging.2010(6)

[2]Differentiation of Effector CD4 T Cell Populations*[J].Jinfang Zhu,Hidehiro Yamane,William E.Paul.Annual Review of Immunology.2010

[3]Anti-TNF immunotherapy reduces CD8^sup+^T cell-mediated antimicrobial activity against Mycobacterium tuberculosis in humans[J].Bruns,Heiko,Meinken,Christoph,Schauenberg,Philipp,H?rter,Georg,Kern,Peter,Modlin,Robert L,Antoni,Christian,Stenger,Steffen.Journal of Clinical Investigation.2009(5)

[4]Altered T-cell subtypes in spondyloarthritis,rheumatoid arthritis and polymyalgia rheumatica[J].Christian Dejaco,Christina Duftner,Andrea Klauser,Michael Schirmer.Rheumatology International.2010(3)

[5]王艳霞.类风湿性关节炎滑膜淋巴细胞CD3、CD4、CD8的表达及意义[D].天津医科大学,2012.