ANTI-CD86抗体的应用

背景^[1-3]

ANTI-CD86抗体是一类可以特异性结合ANTI-CD86的多克隆抗体，主要用于检测ANTI-CD86的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中ANTI-CD86水平。用纯化的ANTI-CD86抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入ANTI-CD86，再与HRP标记的ANTI-CD86抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ANTI-CD86呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中ANTI-CD86浓度。

CD86，别名为B7.2，分子量为80Kd，表达于树突状细胞、单核细胞、记忆T淋巴细胞、生发中心B淋巴细胞、活化B淋巴细胞及活化T淋巴细胞。他属于免疫球蛋白超家族，其配体是CD28和CD152（CTLA4）。

活化的T淋巴细胞在机体的抗肿瘤、抗感染和自身免疫疾病中发挥重要作用。T细胞的活化不仅需要T细胞受体（TCR）与抗原肽-MHC复合物作用产生的信号，还需要表达于抗原提呈细胞（APC）表面的B7家族协同刺激分子与T细胞上的相应受体结合产生的第二信号。

协同刺激分子与其受体结合产生正性或负性信号。协同刺激分子CD80和CD86与其受体CD28结合产生正性信号，或与其受体CTLA-4结合提供负性信号，调节T细胞活性，进而调控机体的免疫反应。协同刺激分子CD80和CD86表达在APC细胞上，而在多数的肿瘤组织及细胞中低表达或不表达，从而不能有效的诱导T细胞的活化，引起肿瘤细胞免疫逃逸而促进肿瘤的发生和发展。

应用^[4][5]

用于益生菌提取物LFK对变应性鼻炎小鼠模型脾脏组织中CD80和CD86表达的影响研究

对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠模型经口途径分别给予酶裂解的肠球菌FK-23株(lysed Enterococcus faecalis FK-23,LFK),观测小鼠脾脏内抗原提呈细胞(antigen-presenting cells,APC)表面组织中共刺激分子CD80和CD86的表达改变,评价益生菌对实验性AR的免疫调节作用。

方法：共计75只BALB/c小鼠随机分为三组：①阳性对照组；②LFK干预组；③阴性对照组。采用OVA腹腔注射及鼻部激发建立小鼠AR模型,阴性对照组小鼠采用生理盐水代替OVA进行腹腔注射及滴鼻。

用LFK菌液分别对AR小鼠模型进行灌胃,共计3周；阳性和阴性对照组以生理盐水代替菌液灌胃处理。观测第21天小鼠搔鼻和喷嚏次数。第22天杀鼠取材,小鼠脾脏组织用免疫组织化学法检测APC表面共刺激分子CD80和CD86的表达。并采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠血清中细胞因子IL-12水平。

结果：第21天小鼠搔鼻和喷嚏次数,阳性对照组及LFK干预组明显高于阴性对照组(P<0.05),LFK干预组明显低于阳性对照组(P<0.05)。血清IL-12水平阳性对照组较阴性对照组显著降低(P<0.001),LFK干预组较阳性对照组显著升高(P<0.001),但与阴性对照组相比仍明显降低(P<0.001)。

小鼠脾脏APC表面共刺激分子组织中CD80的表达,阳性对照组明显低于阴性对照组及LFK干预组(P<0.05),LFK干预组与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)；CD86的表达,阳性对照组明显高于阴性对照组及LFK灌胃干预组(P<0.05),LFK干预组与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。

参考文献

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[2]Evaluation of the Effect of Lactobacillus paracasei(HF.A00232)in Children(6–13 years old)with Perennial Allergic Rhinitis:A 12-week,Double-blind,Randomized,Placebo-controlled Study[J].Wen-Ya Lin,Lin-Shien Fu,Heng-Kuei Lin,Chian-Yin Shen,Yee-Jun Chen.Pediatrics&Neonatology.2013

[3]Protective Effects of Exogenous Surfactant Protein A in Allergic Rhinitis:A Mouse Model[J].Ren,Jie,Deng,Yuqin,Xiao,Bokui,Wang,Guirong,Tao,Zezhang.The Annals of Otology,Rhinology&Laryngology.2013(4)

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[5]张清照.益生菌提取物LFK对变应性鼻炎小鼠模型脾脏组织中CD80和CD86表达的影响[D].南京医科大学,2014.