Anti-HCCS兔多克隆抗体的应用

背景^[1-3]

Anti-HCCS兔多克隆抗体是一类可以特异性结合Anti-HCCS的多克隆抗体，主要用于检测Anti-HCCS的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中Anti-HCCS水平。用纯化的Anti-HCCS抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Anti-HCCS，再与HRP标记的Anti-HCCS抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Anti-HCCS呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中Anti-HCCS浓度。

Anti-HCCS是一种将血红素基团与细胞色素c的载脂蛋白共价连接的酶。该基因的缺陷是引起小眼症综合征7型（MCOPS7）的原因。

细胞色素c为生物氧化过程中的电子传递体。其作用原理为在酶存在的情况下，对组织的氧化、还原有迅速的促酶作用。通常外源性细胞色素C不能进入健康细胞，但在缺氧时，细胞膜的通透性增加，细胞色素C便有可能进入细胞及线粒体内，增强细胞氧化，能提高氧的利用。

来自三羧酸循环中产生的琥珀酸辅酶A，其肽链仅有104个氨基酸，体内大量存在，一般无需外源补充；且外源补充与体内含量相比甚微。细胞色素C是生物氧化的一个非常重要的电子传递体，在线粒体嵴上与其它氧化酶排列成呼吸链，参与细胞呼吸过程。

应用^[4][5]

用于细胞色素C在盘基网柄菌细胞凋亡中表达情况的研究

细胞色素c是线粒体电子传递链中一个重要的载体,在能量代谢方面起着重要的作用,但同时也是线粒体途径细胞凋亡信号通路当中一个关键的因子,它可以激活半胱天冬氨酸蛋白家族(caspases)介导的细胞凋亡信号通路,产生一系列的级联反应,最终导致细胞凋亡。

细胞色素c在细胞凋亡信号通路中的作用在其他生物已经进行了相关的研究,但在盘基网柄菌细胞凋亡过程中鲜有报道,其调控机制和表达情况目前尚不十分清楚。盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)是研究发育和致病机理的重要模型,首先观察了野生型盘基网柄菌(KAX-3)在多细胞发育时期各个阶段的形态特征,然后笔者利用蛋白免疫印迹和SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法,对野生型盘基网柄菌在16h,18h,20h发育阶段的前柄细胞(prestalk cells)和前孢子细胞(prespore cells)当中细胞色素c基因的表达情况在蛋白水平和分子水平进行检测,研究其在盘基网柄菌细胞凋亡过程中所起的作用。

蛋白免疫印迹结果发现：在前柄细胞中，细胞色素c的含量随着细胞凋亡而逐渐增加，在20h达到；而前孢子细胞中细胞色素c的水平保持低水平并趋于平稳。用定量PCR技术测得到的结果是：随细胞凋亡的进程，细胞色索C表达量呈递增趋势，前柄细胞中的表达量明显高于前孢子细胞，与蛋白印法得到的结果十分相似。

参考文献

[1]Specific Ablation of the Apoptotic Functions of Cytochrome c Reveals a Differential Requirement for Cytochrome c and Apaf-1 in Apoptosis[J].Zhenyue Hao,Gordon S.Duncan,Chia-Che Chang,Andrew Elia,Min Fang,Andrew Wakeham,Hitoshi Okada,Thomas Calzascia,YingJu Jang,Annick You-Ten,Wen-Chen Yeh,Pamela Ohashi,Xiaodong Wang,Tak W.Mak.Cell.2005(4)

[2]CYTOCHROME C-MEDIATED APOPTOSIS[J].Xuejun Jiang,Xiaodong Wang.Annual Review of Biochemistry.2004

[3]Dictyostelium morphogenesis[J].Cornelis J Weijer.Current Opinion in Genetics&Development.2004(4)

[4]Three-Dimensional Structure of the Apoptosome[J].Devrim Acehan,Xuejun Jiang,David Gene Morgan,John E Heuser,Xiaodong Wang,Christopher W Akey.Molecular Cell.2002(2)

[5]叶平.细胞色素C在盘基网柄菌细胞凋亡中表达情况的研究[D].华东师范大学,2011.