Anti-HCCS抗体的应用

背景^[1-3]

Anti-HCCS抗体是一类可以特异性结合Anti-HCCS的多克隆抗体，主要用于检测Anti-HCCS的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中Anti-HCCS水平。用纯化的Anti-HCCS抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Anti-HCCS，再与HRP标记的Anti-HCCS抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Anti-HCCS呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中Anti-HCCS浓度。

HCCS编码的细胞色素c型血红素裂解酶是一种将血红素基团与细胞色素c的脱辅基蛋白共价连接的酶。HCCS中的缺陷是引起小眼症7型综合征（MCOPS7）的原因。

细胞色素一类以铁卟啉（或血红素）作为辅基的电子传递蛋白，广泛参与动、植物，酵母以及好氧菌、厌氧光合菌等的氧化还原反应。细胞色素作为电子载体传递电子的方式是通过其血红素辅基中铁原子的还原态(Fe2+)和氧化态（Fe3+）之间的可逆变化。任何一类细胞蛋白（血红素蛋白），在细胞能量转移中起着极为重要的作用。细胞色素可按其吸收的光的波长分为3类，已鉴定出至少30种不同的细胞色素。

高等动物的细胞色素c由104个氨基酸残基的一条肽链组成；分子量约为13000,在共价结合的血红素辅基中；铁原子的第5、6个配位键被组氨酸咪唑基的氮原子和甲硫氨酸的硫原子所占据,因而还原型的细胞色素c不能被氧直接氧化。它催化电子从细胞色素还原酶（或称bc1复合物）传递到细胞色素氧化酶（或称细胞色素aa3）。

应用^[4][5]

用于腺病毒介导的HCCS1基因抗肿瘤作用及其机制的研究Prohibitin（PHB）作为肿瘤血清标志物的初步研究

HCCS1是通过对肝细胞癌病人染色体17p13.3区域的杂合性缺失进行分析发现的新抑癌基因。研究显示，在肝细胞癌组织中HCCS1的表达水平明显低于癌旁正常组织。将HCCS1基因克隆后转染人肝癌细胞株发现，其在体外和体内均可以明显抑制肝癌细胞的生长。上述结果显示了HCCS1基因在肝癌的发生、发展过程中起着重要的作用，同时提示了其作为抗肿瘤治疗基因的应用价值。

以腺病毒为载体探讨HCCS1作为治疗基因在肿瘤生物治疗中的运用前景，并对其抑癌作用的分子机制做了初步的探索。利用AdEasy系统构建并包装携带有HCCS1基因的复制缺陷型腺病毒Ad-HCCS1，并通过半定量RT-PCR和Western blot确定证实Ad-HCCS1感染能介导细胞HCCS1的高表达。

将重组病毒感染293细胞进行大量扩增，通过CsCl梯度离心纯化病毒，并运用293细胞空斑形成实验对纯化的Ad-HCCS1和对照腺病毒Ad的滴度进行测定，其滴度分别为4.5×1010和3×1010。细胞存活试验结果显示Ad-HCCS1对人肝癌细胞BEL7404和人结肠癌细胞SW620的生长具有显著的抑制作用（P＜0.01），而对人正常胚肺成纤维细胞NHLF的作用较弱。

对其分子机制的研究发现，在HCCS1诱导的细胞凋亡过程中，Bcl-2家族成员Bax而非Bid被剪切，并插入线粒体膜，引起细胞线粒体膜电位的改变，从而导致细胞色素C（Cyto C）的释放。释放到胞浆的Cyto C进一步通过活化caspase-9和caspase-3促进细胞的凋亡，caspase-9特异性抑制剂或caspase广谱抑制剂都能明显缓解HCCS1诱导的细胞凋亡。而在凋亡过程中则未检测到caspase-8和caspase-12的活化。HCCS1高表达也能导致AIF从线粒体释放到胞浆，但其并不进一步转位入细胞核促进凋亡。

参考文献

[1]The Drosophila Tumor Suppressor vps25 Prevents Nonautonomous Overproliferation by Regulating Notch Trafficking[J].Thomas Vaccari,David Bilder.Developmental Cell.2005(5)

[2]Mutations in erupted,the Drosophila Ortholog of Mammalian Tumor Susceptibility Gene 101,Elicit Non-Cell-Autonomous Overgrowth[J].Kenneth H.Moberg,Suzanne Schelble,Sharon K.Burdick,Iswar K.Hariharan.Developmental Cell.2005(5)

[3]Characterization of the human GARP(Golgi associated retrograde protein)complex[J].Heike Liewen,Ivo Meinhold-Heerlein,Vasco Oliveira,Robert Schwarzenbacher,Guorong Luo,Andreas Wadle,Martin Jung,Michael Pfreundschuh,Frank Stenner-Liewen.Experimental Cell Research.2005(1)

[4]The prohibitin 3′untranslated region polymorphism is not associated with risk of ovarian cancer[J].Amanda B Spurdle,David M Purdie,Xiaoqing Chen,Georgia Chenevix-Trench.Gynecologic Oncology.2003(1)

[5]甘愉.腺病毒介导的HCCS1基因抗肿瘤作用及其机制的研究Prohibitin（PHB）作为肿瘤血清标志物的初步研究[D].复旦大学,2007.