兔抗AKT多克隆抗体的应用

背景^[1-3]

兔抗AKT多克隆抗体是一类可以特异性结合Anti-JAK1的多克隆抗体，主要用于检测Anti-JAK1的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中Anti-JAK1水平。用纯化的Anti-JAK1抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Anti-JAK1，再与HRP标记的Anti-JAK1抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Anti-JAK1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中Anti-JAK1浓度。

PKB是一种相对分子约为6.0×10^4的Ser/Thr蛋白激酶，与PKA和PKC均有很高的同源性，故又称为PKA与PKC的相关激酶（related to the A and C kinase,RAC-PK）,该激酶被证明是反转录病毒安基因v-akt的编码产物，故又称Akt。

蛋白激酶B，即Akt，又称PKB或Rac，在细胞存活和凋亡中起重要作用。胰岛素等生长和存活因子都可以激活Akt信号途径。Akt的Thr308可以被PDK1磷酸化。PI3 Kinase-Akt信号途径是一条经典的信号途径，LY294002等PI3 kinase的抑制剂抑制PI3 kinase时，通常就会抑制Akt激活。

应用^[4][5]

用于MiR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌侵袭转移的机制研究

探讨miR-21、PTEN/PI3K／AKT信号转导通路相关蛋白在结直肠癌(CRC)中的表达及临床意义。

方法：应用实时荧光定量RT-PCR（real-time fluorescence quantitiveRT-PCR,real time FQ-PCR）检测结直肠癌组织中的miR-21表达水平，应用免疫组化（immunohistochemistry，IHC）SP法检测结直肠癌组织中PTEN、PI3K、AKT的表达水平。

并探索他们之间的关系，以及与临床病理参数之间的相关性。结果：与癌旁正常组织比较，miR-21的表达水平明显增高（p<0.05）,PTEN的表达水平明显降低（p<0.05）,PI3K、AKT的表达水平均明显增高（p<0.05）,miR-21、PTEN、PI3K、Akt表达与患者年龄、性别、肿瘤部位无关（P>0.05），与肿瘤分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结转移有关（P<0.05）。

miR-21与PTEN的表达之间呈负相关（r=-0.396,p<0.05）；PTEN与PI3K蛋白阳性表达之间呈负相关（r=-0.354,P<0.05）；PTEN与Akt蛋白阳性表达之间呈负相关（r=-0.365,P<0.05）；PI3K与Akt蛋白阳性表达之间呈正相关（r=0.645,P<0.05）。结论：miR-21可通过抑制PTEN激活P13K／Akt信号通路，进而促进CRC的发生发展。

参考文献

[1]miR-21 modulates chemosensitivity of tongue squamous cell carcinoma cells to cisplatin by targeting PDCD4[J].Wenhao Ren,Xiaolong Wang,Ling Gao,Shaoming Li,Xiaojing Yan,Jin Zhang,Chen Huang,Yincheng Zhang,Keqian Zhi.Molecular and Cellular Biochemistry.2014(1-2)

[2]Cancer statistics,2014[J].Rebecca Siegel,Jiemin Ma,Zhaohui Zou,Ahmedin Jemal.CA A Cancer Journal for Clinicians.2014(1)

[3]The MicroRNA-21/PTEN Pathway Regulates the Sensitivity of HER2-Positive Gastric Cancer Cells to Trastuzumab[J].Kojiro Eto,Masaaki Iwatsuki,Masayuki Watanabe,Satoshi Ida,Takatsugu Ishimoto,Shiro Iwagami,Yoshifumi Baba,Yasuo Sakamoto,Yuji Miyamoto,Naoya Yoshida,Hideo Baba.Annals of Surgical Oncology.2014(1)

[4]Targeting miR-21 enhances the sensitivity of human colon cancer HT-29 cells to chemoradiotherapy in vitro[J].Jun Deng,Wan Lei,Jian-Chun Fu,Ling Zhang,Jun-He Li,Jian-Ping Xiong.Biochemical and Biophysical Research Communications.2013

[5]熊兵红.MiR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌侵袭转移的机制研究[D].重庆医科大学,2014.