PK136细胞的应用

背景^[1-3]

PK136细胞由SP2/0-Ag14骨髓瘤和用CE小鼠脾细胞和骨髓细胞免疫的（C3H X BALB/C）F1小鼠的脾细胞融合而成。此抗体对NK特异且在有补体时有细胞毒作用。此抗体与不同小鼠株的细胞的反应方式，与常规的NK1.1抗血清的反应方式相符。杂交瘤细胞系PK136分泌一种小鼠单克隆抗体（IgG2a），此抗体与小鼠NK细胞起反应。

杂交瘤细胞（hybridoma）是一种在制备单克隆抗体过程中，用骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合而成的细胞。杂交瘤细胞一般通过瘤细胞培养来制备。

杂交瘤技术是指两个或两个以上细胞合并形成一个细胞的现象。他可使两个不同来源的细胞核在同一细胞中表达功能。

杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠细胞与小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。

在选择培养基的作用下，只有b细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞，这种杂种细胞叫做杂交瘤细胞。

应用^[4][5]

用于天然杀伤细胞促进记忆性CD8~+T细胞产生及其相关机制的实验研究

采用抗体体内注射方法清除NK细胞,观察NK细胞清除后CD8T细胞初次应答情况及CD8Tm细胞产生情况。

PK136杂交瘤产生特异性针对小鼠NK1.1分子的单克隆抗体,我们制备该杂交瘤腹水并进行抗体纯化定量。day-2和day0（感染当天）时各给予一次PK136抗体或同型对照抗体腹腔注射清除NK1.1+细胞,通过动态观察发现,在最后一次抗体注射后的3周内,NK细胞的清除率维持在90%以上,NK细胞数在第4周末时基本恢复如常,这可能是由于过量抗体在体内维持并持续清除新产生的少量NK细胞,直至抗体代谢完全。

清除NK细胞后,对CD8T细胞初次免疫应答的分析发现,在免疫应答高峰期（感染后7天）,NK细胞清除组小鼠Thy-1.1+CD8T细胞在各脏器中的比例以及在脾脏中的绝对数均与对照组相似,两组小鼠中Thy-1.1+效应性CD8T细胞的表型特征（CD27,CD44,CD62L,CD122,CD127,KLRG-1）及细胞因子分泌（IFN-γ,TNF-α,IL-2）均未见明显差异。

这说明在针对李斯特菌感染的初次免疫应答过程中,NK细胞对CD8T细胞初次应答的数量和质量上均没有重要影响。但在感染后第40天,NK细胞清除组小鼠中Thy-1.1+CD8Tm细胞在各脏器CD8+细胞中所占比例和脾脏中的绝对数均显著低于对照组。

参考文献

[1]The Molecular Basis for Perforin Oligomerization and Transmembrane Pore Assembly[J].Katherine Baran,Michelle Dunstone,Jenny Chia,Annette Ciccone,Kylie A.Browne,Christopher J.P.Clarke,Natalya Lukoyanova,Helen Saibil,James C.Whisstock,Ilia Voskoboinik,Joseph A.Trapani.Immunity.2009(5)

[2]Human and Mouse Granzyme A Induce a Proinflammatory Cytokine Response[J].Sunil S.Metkar,Cheikh Menaa,Julian Pardo,Baikun Wang,Reinhard Wallich,Marina Freudenberg,Stephen Kim,Srikumar M.Raja,Lianfa Shi,Markus M.Simon,Christopher J.Froelich.Immunity.2008(5)

[3]Acquisition of Murine NK Cell Cytotoxicity Requires the Translation of a Pre-existing Pool of Granzyme B and Perforin mRNAs[J].Todd A.Fehniger,Sheng F.Cai,Xuefang Cao,Andrew J.Bredemeyer,Rachel M.Presti,Anthony R.French,Timothy J.Ley.Immunity.2007(6)

[4]Dendritic Cells Prime Natural Killer Cells by trans-Presenting Interleukin 15[J].Mathias Lucas,William Schachterle,Karin Oberle,Peter Aichele,Andreas Diefenbach.Immunity.2007(4)

[5]姚雨石.天然杀伤细胞促进记忆性CD8~+T细胞产生及其相关机制的实验研究[D].第二军医大学,2009.