(2E)-3-(3-氯苯基)-N-[2-[甲基(四氢-1，1-二氧代-2H-噻喃-4-基)氨基]-2-氧代乙基]-2-丙烯酰胺的制备

背景及概述^[1-2]

(2E)-3-(3-氯苯基)-N-[2-[甲基(四氢-1，1-二氧代-2H-噻喃-4-基)氨基]-2-氧代乙基]-2-丙烯酰胺（ML264）是一种抗肿瘤剂，可有效和选择性地抑制Krüppel样因子5(KLF5)表达。

每日一次以10 mg / kg的剂量注射ML264不会显着影响肿瘤的生长。 但是，每天两次以10 mg / kg或25 mg / kg的剂量注射ML264会导致肿瘤生长显着减少，并且这种影响最早可在次注射后两天就检测到。 数据还表明，ML264对肿瘤体积具有浓度依赖性作用。 肿瘤生长的统计分析表明，与仅在第5天和第10天仅接受媒介物的小鼠相比，每天用ML264处理两次的小鼠的肿瘤大小明显减少。

制备^[1]

步骤1：2-（3-（3-氯苯基）丙烯酰胺基）乙酸（E）甲酯

向在二氯甲烷（10mL）中的（E）-3-（3-氯苯基）丙烯酸（1.0g，5.48mmol）中加入无水二甲基甲酰胺（DMF）（0.08mL，1.0mmol），将该溶液冷却至0℃，然后滴加草酰二氯（0.57mL，6.53mmol），使反应升温至室温，两小时后，将反应混合物重新冷却至0℃，并将甘氨酸甲酯的HCl盐（1.38g，10.99mmol）和二异丙基乙胺（DIEA，3.8mL，21.92mmol）的混合物冷却至0℃，缓慢加入二氯甲烷（10mL），将反应在室温搅拌过夜。真空除去溶剂，得到粗产物，将其通过快速色谱纯化（AcOEt/Hex10-100％），得到标题化合物1.19g（86％）。ESI-MS（m/z）：254，[M+1]+。

步骤2.（E）-2-（3-（3-（3-氯苯基）丙烯酰胺基）乙酸

向（E）2-（3-（3-（3-氯苯基）丙烯酰胺基）甲基乙酸甲酯（1.553g，6.14mmol）的MeOH（10mL）溶液中加入2.0NNaOH（6.2mL，12.4mmol），将混合物在室温搅拌1h，之后分析型HPLC表明反应完成，用1NHCl溶液酸化混合物，真空除去溶剂，得到粗产物，其无需进一步纯化即可用于下一步。ESI-MS（m/z）：240，[M+1]+。

步骤3.(2E)-3-(3-氯苯基)-N-[2-[甲基(四氢-1，1-二氧代-2H-噻喃-4-基)氨基]-2-氧代乙基]-2-丙烯酰胺

向（E）-2-（3-（3-氯苯基）丙烯酰胺基）乙酸（31.5mg，0.13mmol）在DMF（1mL）中的混合物中添加DIEA（52mg，0.4mmol）和HATU（50mg，0.13mmol），将混合物搅拌5分钟，然后加入4-（甲基氨基）四氢-2H-噻喃1，1-二氧化物盐酸盐（26mg，0.13mmol）。将反应混合物在室温搅拌30分钟，通过分析型HPLC监测完成反应，真空除去溶剂，得到粗产物，将其通过制备型HPLC（乙腈/MeOH（1：1）/水40〜100％）纯化，得到标题化合物(2E)-3-(3-氯苯基)-N-[2-[甲基(四氢-1，1-二氧代-2H-噻喃-4-基)氨基]-2-氧代乙基]-2-丙烯酰胺24.6mg（49％）。

参考文献

[1]WO2014018859-KLF5 MODULATORS

[2] Ruiz de Sabando A, et al. ML264, A Novel Small-Molecule Compound That Potently Inhibits Growth of Colorectal Cancer. Mol Cancer Ther. 2016 Jan;15(1):72-83.