单克隆抗体制备服务的应用

背景^[1-3]

单克隆抗体制备服务是根据客户需要研发和生产商品化单克隆抗体的技术服务。

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体即单克隆抗体。

原理是:B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂;而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性。免疫反应是人类对疾病具有抵抗力的重要因素。当动物体受抗原刺激后可产生抗体。抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇，各种抗原分子具有很多抗原决定簇，因此，免疫动物所产生的抗体实为多种抗体的混合物。用这种传统方法制备抗体效率低、产量有限，且动物抗体注入人体可产生严重的过敏反应。此外，要把这些不同的抗体分开也极困难。

单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)作用下发生细胞融合；加入HAT选择培养基(含H、A和T)后，未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断，而又缺乏HGPRT不能利用补救途径合成DNA，从而死亡；未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡；融合细胞因从脾细胞获得HGPRT，故可在HAT选择培养基中存活和增殖。

应用^[4][5]

用于胰腺癌等肿瘤标志物（CA19-9）单克隆抗体制备及检测方法的初步建立

选用QuickAntibody新型免疫佐剂与弗氏完全佐剂、弗式不完全佐剂分别对BALB/c小鼠进行免疫，二者采取不同的免疫方式、免疫周期与免疫剂量，依据血清效价检测值评价免疫效果和待融合小鼠。

细胞融合后利用半固体培养基（甲基纤维素）克隆化法进行克隆化。获得的阳性杂交瘤细胞株制备腹水后利用辛酸硫酸铵沉淀法进行纯化。经单克隆抗体鉴定后，将合格的单克隆抗体进行配对，并进行检测体系探索，最终确立CA19-9双抗体夹心ELISA检测方法。

免疫效价结果表明：Qucik Antibody免疫方式可在3周达到常规弗氏完全佐剂的免疫效果。3次细胞融合的融合率分别为：88.3%、83.9%和91.2%，半固体克隆化（MC）法最终筛得单克隆抗体3株，分别为：ZJY1-2C8、ZJY2-7F10、ZJY3-1G9。利用ZJY3-1G9作为包被抗体，ZJY2-7F10作为酶标抗体的配对结果，构建双抗体夹心ELISA检测方法。

室内参照品依据国外试剂盒确定，最终得到的线性方程为：y=0.0063x+0.0967，R2=0.9895。线性范围为30U/mL~300U/mL。批内与批间精密性变异系数CV值均小于10%，符合要求。

参考文献

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[2]Preoperative Serum CA19-9 and Dissected Peripancreatic Tissue Margin as Determiners of Long-Term Survival in Pancreatic Cancer[J].Mina Waraya,Keishi Yamashita,Hiroyuki Katagiri,Kenichiro Ishii,Yoshihito Takahashi,Kazunori Furuta,Masahiko Watanabe.Annals of Surgical Oncology.2009(5)

[3]Prognostic Value of CEA and CA 19-9 Tumor Markers Combined with Cytology from Peritoneal Fluid in Colorectal Cancer[J].In Kyu Lee,Do Hyoung Kim,D.Lee Gorden,Yoon Suk Lee,Na Young Sung,Gyeoung-Sin Park,Hyung Jin Kim,Won Kyung Kang,Jong Kyung Park,Chang Hyeok Ahn,Jun-Gi Kim,Hae Myung Jeon,Seong Taek Oh.Annals of Surgical Oncology.2009(4)

[4]The clinical value of serum CEA,CA19-9,and CA242 in the diagnosis and prognosis of pancreatic cancer[J].X.G.Ni,X.F.Bai,Y.L.Mao,Y.F.Shao,J.X.Wu,Y.Shan,C.F.Wang,J.Wang,Y.T.Tian,Q.Liu,D.K.Xu,P.Zhao.European Journal of Surgical Oncology.2004(2)

[5]翟晋豫.胰腺癌等肿瘤标志物（CA19-9）单克隆抗体制备及检测方法的初步建立[D].河南师范大学,2014.